[發明專利]華法林的檢測方法

有效

• 申請號: 202010869106.0
• 申請日: 2020-08-25
• 公開（公告）號: CN111929394B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 賈永娟;劉春冉;翟瑞雪;倪君君
• 申請（專利權）人: 北京和合醫學診斷技術股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京開陽星知識產權代理有限公司 11710
• 代理人: 呂亞會

1.華法林的檢測方法，其特征在于，包括：

制備至少三種濃度的標準溶液，其中，所述標準溶液為具有華法林和內標物的溶液，且所述至少三種濃度的標準溶液中的內標物的量相同；

利用液相色譜質譜聯用儀在預設的檢測條件下分別檢測每一種所述標準溶液，獲得每一種所述標準溶液對應的第一檢測結果；

根據各個所述第一檢測結果、所述標準溶液中的華法林和內標物的濃度，擬合華法林的標準曲線方程；

對待處理樣品進行離心處理，取離心后的第一上清液，所述待處理樣品的取用量為2-10 μL；

向所述第一上清液內加入沉淀蛋白試劑和含有內標物的內標工作液，渦旋混合，并高速離心，取離心后的第二上清液作為待測樣品；

所述沉淀蛋白試劑選自甲醇溶液，所述沉淀蛋白試劑與所述第一上清液的體積比為1:8；

利用液相色譜質譜聯用儀在所述檢測條件下檢測所述待測樣品，獲得所述待測樣品的第二檢測結果；

基于所述標準曲線方程和所述第二檢測結果，得到所述待測樣品中華法林的濃度；

所述內標物為華法林-D5；

所述檢測條件中的液相條件，包括：

色譜柱為Waters Atlantis dC18 2.1*50 mm 5 μm；Aglient Extend-C18 2.1*50 mm5 μm；2.1*50 mm 5 μm；Aglient XDB-C8 2.1*50 mm 5 μm；SHIMADZU-SP-C18 2.1*50 mm 5μm或Aglient-SB-Aq 2.1*50 mm 5 μm；

洗脫流動相為有機相和水相，其中，有機相為甲醇溶液；

柱溫為18℃-50℃；

流速為0.2-0.6 mL/min；

所述洗脫流動相中的有機相與水相的比例為：

所述洗脫流動相中的有機相中含有0-1 mmol/L的緩沖鹽和0-0.5%的甲酸；

所述洗脫流動相中的水相中含有0-10 mmol/L的緩沖鹽和0-0.5%的甲酸；

所述檢測條件中的質譜條件，包括：

所述液相色譜質譜聯用儀中的質譜檢測器為ESI+檢測模式；

所述液相色譜質譜聯用儀中的離子源參數為：加熱氣流速:8-12L/min，霧化氣流速:30-35 L/min，加熱氣溫度:300-350℃，毛細管電壓:3000-4000 V；

所述檢測方法的檢測限為0.077 ng/mL，定量限為0.23 ng/mL。

2.根據權利要求1所述的華法林的檢測方法，其特征在于，

所述標準曲線方程的兩個變量分別為：所述第一檢測結果中的華法林的色譜峰面積與內標物的色譜峰面積的比值，以及所述標準溶液中的華法林的濃度與內標物的濃度的比值。

3.根據權利要求1或2所述的華法林的檢測方法，其特征在于，

所述向所述第一上清液內加入沉淀蛋白試劑和含有內標物的內標工作液，渦旋混合，并高速離心，取離心后的第二上清液作為待測樣品，包括：

向所述第一上清液內加入含有內標物的內標工作液，在1500-2500rpm的轉速下渦旋震蕩混合30s-1min；

順次向混合后的所述第一上清液中加入沉淀蛋白試劑，在1200-2000rpm的轉速下渦旋震蕩混合2-4min后，并在10000-15000rpm的轉速下高速離心5-10min，取離心后的第二上清液作為待測樣品。