[發(fā)明專利]一種檢測寨卡病毒包膜蛋白E特異性抗體的ELISA試劑盒及重組ZV包膜蛋白E的制備在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010859811.2 | 申請日： | 2020-08-24 |
| 公開（公告）號： | CN111944836A | 公開（公告）日： | 2020-11-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 許鍇;羅永能;陳卓;舒曠怡;陶薇;方?？?/a>;高麗美;蔡靜;姜慧芬 | 申請（專利權(quán)）人： | 溫州市人民醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C07K19/00;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543 |
| 代理公司： | 溫州匠心專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33279 | 代理人： | 胡仁勇 |
| 地址： | 325000 *** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 病毒 包膜 蛋白 特異性 抗體 elisa 試劑盒 重組 zv 制備 | ||
1.一種重組寨卡病毒包膜蛋白E的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟一，根據(jù)寨卡病毒包膜蛋白E胞外表面區(qū)的氨基酸序列，在寨卡病毒包膜蛋白E胞外表面區(qū)整段及其N端添加MGHHHHHHGLVPRGS標(biāo)簽的編碼序列克隆至表達(dá)質(zhì)粒pET-28a；步驟二，進(jìn)行密碼子優(yōu)化；步驟三，利用原核表達(dá)系統(tǒng)誘導(dǎo)表達(dá)并純化獲得重組寨卡病毒包膜蛋白E。
2.一種檢測寨卡病毒包膜蛋白E特異性抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：包括包被了權(quán)利要求1所述的重組寨卡病毒包膜蛋白E的酶標(biāo)板、樣品稀釋液、陰性對照血清、陽性對照血清、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體、濃縮洗滌液、酶底物溶液和終止液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測寨卡病毒包膜蛋白E特異性抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)板通過如下方法制備：通過大腸桿菌-質(zhì)粒原核系統(tǒng)重組表達(dá)ZV包膜蛋白E并純化，用包被緩沖液將蛋白稀釋至1微克/毫升；以100微升/孔的量包被于96孔酶標(biāo)板中，4℃反應(yīng)過夜后洗板3次；每孔加入200微升含有1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行封閉，37℃孵育1小時后洗板3次，晾干后備用。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測寨卡病毒包膜蛋白E特異性抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：所述試劑盒在檢測寨卡病毒特異性抗體中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測寨卡病毒包膜蛋白E特異性抗體的ELISA試劑盒，其特征在于：所述試劑盒在對于寨卡病毒感染情況以及相應(yīng)血清學(xué)和流行病學(xué)研究中的應(yīng)用。
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