[發明專利]一種量化干燥再濕潤后土壤活性磷含量增加來源的方法

有效

• 申請號: 202010859010.6
• 申請日: 2020-08-24
• 公開（公告）號: CN111965178B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 方芳;王超;郭勁松;高藝倫;晏鵬;陳猷鵬;劉智萍;楊吉祥
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/42;G01N1/38;G01N1/44
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 萬霞

1.一種量化干燥再濕潤后土壤活性磷含量增加來源的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1：采集鮮土經篩分后分成兩部分，一部分密封后放置在冰箱內冷藏保存，該部分作為鮮土樣品；另一部分在室溫下避光風干，并使風干后的土壤含水率≤5％，該部分作為風干土樣品；

S2：分別稱取步驟S1得到的鮮土樣品和風干土樣品，然后分別置于離心管內，并向裝有風干土樣品的離心管內加入超純水，以使風干土樣品含水率等于風干前鮮土含水率，使風干土經歷再濕潤過程，然后靜置、備用；

S3：向步驟S2裝有鮮土樣品和風干土樣品的離心管中分別加入0.5mol/LNaHCO₃溶液，土壤干重與NaHCO₃溶液的質量體積比為1g:20mL，震蕩、離心后得鮮土樣品和風干土樣品的上清液，然后分別測定鮮土樣品中無機活性磷含量Olsen-IP_鮮和風干土樣品中無機活性磷含量Olsen-IP_風；

S4：量取少量步驟S3得到的鮮土樣品和風干土樣品的上清液，并分別加入過硫酸鉀溶液，然后121℃消解后測定鮮土樣品中活性磷含量Olsen-TP_鮮和風干土樣品中活性磷含量Olsen-TP_風，并根據式(1)、式(2)、式(3)、式(4)和式(5)分別計算得到鮮土樣品中有機活性磷含量Olsen-OP_鮮、風干土樣品中有機活性磷含量Olsen-OP_風以及干燥再濕潤后的風干土樣品相對于鮮土樣品無機活性磷含量的增加量ΔOlsen-IP、有機活性磷含量的增加量ΔOlsen-OP、活性磷含量的增加量ΔOlsen-TP：

Olsen-OP_鮮＝(Olsen-TP_鮮)-(Olsen-IP_鮮) (1)

Olsen-OP_風＝(Olsen-TP_風)-(Olsen-IP_風) (2)

ΔOlsen-IP＝(Olsen-IP_風)-(Olsen-IP_鮮) (3)

ΔOlsen-OP＝(Olsen-OP_風)-(Olsen-OP_鮮) (4)

ΔOlsen-TP＝(Olsen-TP_風)-(Olsen-TP_鮮) (5)

S5：分別量取10mL步驟S3得到的鮮土樣品上清液和風干土樣品上清液置于50mL離心管內，再先后加入酸、堿調節各上清液pH值至7.0±0.1，然后定容至25mL備用；

S6：量取100μL步驟S5得到的鮮土樣品上清液三份和風干土樣品上清液三份置于96孔板中，然后向三份鮮土樣品上清液和三份風干土樣品上清液中分別加入9μL酶溶液A、酶溶液B和酶溶液C，其中酶溶液A為Tris-HCl緩沖液和堿性磷酸酶的混合溶液，酶溶液B為Tris-HCl緩沖液、堿性磷酸酶和磷酸二酯酶的混合溶液，酶溶液C為Tris-HCl緩沖液、堿性磷酸酶、磷酸二酯酶和植酸酶的混合溶液，并且酶溶液A、酶溶液B和酶溶液C中Tris-HCl緩沖液的濃度為0.1mol/L；再向上述六份上清液中分別加入10μL，0.068mol/L檸檬酸鈉，然后置于37℃培養室避光培養16h；

S7：培養結束后，向六份上清液中加入30μL，2％十二烷基苯磺酸鈉，再添加超純水定容至200μL，再添加10μL的磷鉬藍顯色劑，放置37℃培養箱內靜置30min，然后用880nm波長的酶標儀測定各上清液的吸光度；

S8：分別吸取2ug/mL磷標準溶液0.0μL、10μL、20μL、30μL、40μL、50μL于96孔板中，平行設置三組，分別加入9μL酶溶液A、酶溶液B和酶溶液C，再加入10μL 0.068mol/L檸檬酸鈉，置于37℃培養室避光培養16h；培養結束后，加入30μL，2％十二烷基苯磺酸鈉SDS，加入超純水定容至200μL，再加入10μL的磷鉬藍顯色劑，放置37℃培養箱內靜置30min，然后用880nm波長的酶標儀測定各上清液的分光光度在880nm波長下分別測定各標準溶液的吸光度，最后以吸光度為橫坐標，相應的磷濃度為縱坐標，繪制標準曲線；

S9：磷含量采用步驟S8對應的標準曲線計算得到，然后分別根據式(6)、式(7)、式(8)、式(9)和式(10)計算得到活性單酯磷含量m₁、二酯磷含量m₂和植酸磷含量m₃，其中，鮮土樣品中活性單酯磷含量、二酯磷含量和植酸磷含量分別記為m_1鮮、m_2鮮和m_3鮮，風干土樣品活性單酯磷含量、二酯磷含量和植酸磷含量分別記為m_1風、m_2風和m_3風；

m₁＝(Olsen-TP_A)-(Olsen-IP) (6)

m₂＝(Olsen-TP_B)-(Olsen-TP_A) (7)

m₃＝(Olsen-TP_C)-(Olsen-TP_B) (8)

式中：Olsen-TP_A—酶溶液A酶解后上清液中活性磷含量，mg/kg；

Olsen-TP_B—酶溶液B酶解后上清液中活性磷含量，mg/kg；

Olsen-TP_C—酶溶液C酶解后上清液中活性磷含量，mg/kg；

所以，土壤經干燥再濕潤后，不易遷移磷轉化為無機活性磷的含量M₁為：M₁＝ΔOlsen-IP＝(Olsen-IP_風)-(Olsen-IP_A鮮)

微生物死亡得到的有機活性磷的含量M₂為：M₂＝(m_1風+m_2風)-(m_1鮮+m_2鮮)＝[(Olsen-TP_B風)-(Olsen-IP_風)]-[(Olsen-TP_B鮮)-(Olsen-IP_鮮)]

植物殘體分解得到的有機活性磷的含量M₃為：M₃＝m_3風-m_3鮮＝[(Olsen-TP_C風)-(Olsen-TP_B風)]-[(Olsen-TP_C鮮)-(Olsen-TP_B鮮)]

從而完成土壤經干燥再濕潤過程后各土壤活性磷含量來源的量化。