[發(fā)明專利]一種土壤微生物群調(diào)節(jié)劑及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010858624.2
• 申請(qǐng)日: 2020-08-24
• 公開（公告）號(hào): CN111944726A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳喜云;劉暉;鐘玉鳴;張貫升
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州市土根旺生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/16;C12R1/04;C12R1/065;C12R1/01;C12R1/865;C12R1/645
• 代理公司: 深圳市智勝聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44368
• 代理人: 齊文劍

1.一種土壤微生物群調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)制備酵母多肽：將釀酒酵母接種于S0培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)氨氮去除率達(dá)到60％、總氮去除率達(dá)到50％、總磷去除率達(dá)到50％，且OD值大于1或細(xì)胞密度大于等于1.5×10⁸個(gè)/mL時(shí)，將菌體離心過濾，然后接種于S1培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)酵母蛋白含量增幅超過180％-200％時(shí)，將菌體離心過濾，得到多肽累積的釀酒酵母；

將黏紅酵母接種于S0培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)氨氮去除率達(dá)到70％、總氮去除率達(dá)到60％、總磷去除率達(dá)到50％，且OD值大于1或細(xì)胞密度大于等于1.5×10⁸個(gè)/mL時(shí)，將菌體離心過濾，然后接種于S2培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)酵母蛋白含量增幅超過180％-200％時(shí)，將菌體離心過濾，得到多肽累積的黏紅酵母；

將所述多肽累積的釀酒酵母與所述多肽累積的黏紅酵母置于S0培養(yǎng)基中進(jìn)行共生培養(yǎng)，得到酵母共培養(yǎng)液；

所述酵母共培養(yǎng)液經(jīng)離心洗滌去除培養(yǎng)基，得到酵母混合物；

將所述酵母混合物與水混合加熱至47℃，再加入氫氧化鈉至質(zhì)量濃度為3％-4％，進(jìn)行超聲-堿液破壁處理，然后調(diào)節(jié)pH至中性，經(jīng)離心處理，所得上清液為酵母上清液，所得沉淀經(jīng)離心、干燥處理，得到酵母改性材料；

將所述酵母上清液在4℃下與95％乙醇混合，靜置5h后離心，所得沉淀為酵母粗蛋白；

所述酵母粗蛋白與胃蛋白酶進(jìn)行混合酶解處理，得到所述酵母多肽；

(2)制備改性高嶺土：將偏高嶺土、氧化鈣、硅酸鈉、所述酵母改性材料按照質(zhì)量比為(80-85):(6-8):(2-4):(5-10)進(jìn)行混合，然后加入10wt％的水粘合，經(jīng)干燥、煅燒、過篩，得到所述改性高嶺土；

(3)制備土壤微生物群調(diào)節(jié)劑：將步驟(1)所得酵母多肽與水按照1:10的質(zhì)量比混合制成溶液，再加入步驟(2)所得改性高嶺土混合吸附，且所述改性高嶺土與所述溶液的質(zhì)量比為1:25，得到所述土壤微生物群調(diào)節(jié)劑；

其中，所述S0培養(yǎng)基包括葡萄糖3g/L，Na₂HPO₄28.73mg/L、NH₄Cl 30mg/L、K₂HPO₄ 100mg/L、KCl50mg/L、MgSO₄ 7H₂O 40mg/L，pH為7.0；

所述S1培養(yǎng)基是將小米、糙米、藜麥按照5:(2-3):(2-3)的質(zhì)量比混合后過篩得到的第一混合物與所述S0培養(yǎng)基混合得到，且所述第一混合物與所述S0培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:9；

所述S2培養(yǎng)基是將大米、大豆、玉米按照(4-5):(2-3):(2-4)的質(zhì)量比混合后過篩得到的第二混合物與所述S0培養(yǎng)基混合得到，且所述第二混合物與所述S0培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:8。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤微生物群調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于，所述接種于S1培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，以及所述接種于S2中進(jìn)行培養(yǎng)的步驟中，所述培養(yǎng)的條件是：DO2-3mg/L，溫度25℃，轉(zhuǎn)速150rpm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤微生物群調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于，所述將菌體離心過濾的步驟中，所述離心的轉(zhuǎn)速為1000rpm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤微生物群調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于，將所述多肽累積的釀酒酵母與所述多肽累積的黏紅酵母置于S0培養(yǎng)基中進(jìn)行共生培養(yǎng)的步驟中，所述多肽累積的釀酒酵母與所述多肽累積的黏紅酵母的加入量之比為1:2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤微生物群調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于，將所述多肽累積的釀酒酵母與所述多肽累積的黏紅酵母置于S0培養(yǎng)基中進(jìn)行共生培養(yǎng)的步驟中，所述共生培養(yǎng)的條件是在25℃、150rpm下培養(yǎng)1d。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述土壤微生物群調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于，所述酵母共培養(yǎng)液經(jīng)離心洗滌去除培養(yǎng)基的步驟中，所述離心的條件是在10000rpm下離心10min。