[發(fā)明專利]一種血清miRNA乳腺癌診斷標志物組合及其檢測試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010858404.X
• 申請日: 2020-08-24
• 公開（公告）號: CN114085906A
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏麗杰;張晶
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽康為醫(yī)學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/113
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乳腺癌是一種常見的惡性腫瘤，最新的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，在全世界女性惡性腫瘤中，發(fā)病率具第一位，死亡率居第二位。乳腺癌的早期診斷可以顯著提高患者的生存期。本發(fā)明涉及一種血清miRNA乳腺癌診斷標志物組合及其檢測試劑盒，由人血清中的hsa?miR?1292?5p,hsa?miR?887?5p,hsa?miR?4658，hsa?miR?6783?3p，hsa?miR?3156?5p和hsa?miR?5581?3p中的1種或多種組成，內(nèi)參基因為U6，并提供了上述miRNA及U6的特異性引物。還提供了陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品、poly?A加尾酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等試劑盒檢測必須的試劑及達到檢測目的所需的技術(shù)解決方案。本發(fā)明可以更早期的檢測出血清中一些瘤源性miRNA的異常升高，用于臨床早期乳腺癌輔助診斷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學領(lǐng)域，具體的涉及一種乳腺癌miRNA標志物的聯(lián)合檢測試劑盒。

背景技術(shù)

乳腺癌是一種常見的惡性腫瘤，目前在全世界的發(fā)病率和死亡率都高居其它惡性腫瘤之首。全球乳腺癌發(fā)病率自20世紀70年代末開始一直呈上升趨勢，美國8名婦女一生中就會有1人患乳腺癌。中國雖不是乳腺癌的高發(fā)國家，但不宜樂觀，近年我國乳腺癌發(fā)病率的增長速度卻高出高發(fā)國家1～2個百分點。據(jù)國家癌癥中心和衛(wèi)生部疾病預防控制局2012年公布的2009年乳腺癌發(fā)病數(shù)據(jù)顯示：全國腫瘤登記地區(qū)乳腺癌發(fā)病率位居女性惡性腫瘤的第1位。由于早期乳腺癌患者的癥狀不明顯，大多數(shù)病人確診時已處于中晚期階段，因此在乳腺癌的預防和治療中，提高乳腺癌的早期診斷起著至關(guān)重要的作用。目前乳腺癌的早期診斷主要依賴影像技術(shù)和腫瘤標志物的檢測。低劑量計算機斷層掃描(LDCT)具有較高的靈敏度，是最常見的乳腺癌篩查和診斷手段。但CT假陽性較高、檢測費用高，并且輻射對人體還有潛在的傷害。血清腫瘤標志物的檢測因其安全無害，費用低且簡單可行，在早期乳腺癌的篩查和診斷中具有重要的作用。

微小RNA(m1RNA)是一類高度保守、內(nèi)源性、非編碼的單鏈小分子RNA，其長度約為19~25nt，主要參與基因轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控，可調(diào)節(jié)不同的生物學過程，如細胞增殖、分化、凋亡、勁附和死亡等，與癌癥的形成和演變密切相關(guān)。miRNA會因為細胞的死亡或者細胞主動分泌進入到血液循環(huán)中，miRNAs在血液中是非常穩(wěn)定的，與mRNAs相比不太容易發(fā)生核酸酶降解。比如，在室溫下孵育血漿樣品長達24小時，對循環(huán)miRNAs水平的影響較小,此外，即使經(jīng)過多次凍融循環(huán)，miRNAs在血漿樣品中仍保持相對穩(wěn)定。另外miRNAs很容易定量，并在不同的病理生理條件下存在差異表達。大量研究表明，miRNAs檢測更早期、更方便、更準確、實現(xiàn)無創(chuàng)診斷。所以，miRNA可以有效用于乳腺癌的早期診斷。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種血清miRNA乳腺癌診斷標志物組合及其檢測試劑盒，可以簡單有效且無創(chuàng)的對乳腺癌進行檢測。

為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，整體技術(shù)方案如下：

提供了一種血清miRNA乳腺癌診斷標志物組合，由人血清中的hsa-miR-1292-5p ,hsa-miR-887-5p ,hsa-miR-4658，hsa-miR-6783-3p，hsa-miR-3156-5p和hsa-miR-5581-3p中的1種或多種組成。

上述的miRNA標志物組合在乳腺癌診斷中的應(yīng)用。

上述的miRNA標志物組合在制備檢測試劑盒中的應(yīng)用。

進一步的，使用上述的miRNA標志物組合檢測試劑盒中的引物和試劑，進行反轉(zhuǎn)錄及qPCR擴增。

本發(fā)明所涉及的hsa-miR-1292-5p，hsa-miR-887-5p，hsa-miR-4658，hsa-miR-6783-3p，hsa-miR-3156-5p和hsa-miR-5581-3p中的每種miRNA的序列是已知公開的。

表1 上述miRNA序列及U6的公共數(shù)據(jù)庫信息