[發(fā)明專利]適用于桑黃生長(zhǎng)發(fā)育研究的內(nèi)參基因及其內(nèi)參引物的篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010856481.1
• 申請(qǐng)日: 2020-08-24
• 公開（公告）號(hào): CN112210617B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 霍進(jìn)喜;李有貴;鐘石;孫雨晴;朱儉勛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6809;C12N15/11;C12N15/31;C12N15/54
• 代理公司: 杭州中利知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 33301
• 代理人: 劉昕

1.適用于桑黃生長(zhǎng)發(fā)育研究的內(nèi)參基因，其特征在于：包括SIP內(nèi)參基因和RSMG內(nèi)參基因，所述SIP內(nèi)參基因的核酸序列為No.2，所述RSMG內(nèi)參基因的核酸序列為No.4。

2.如權(quán)利要求1所述的適用于桑黃生長(zhǎng)發(fā)育研究的內(nèi)參基因，其特征在于：所述SIP內(nèi)參基因和RSMG內(nèi)參基因的正向引物和反向引物的核苷酸序列如下所示：

SIP-F：TCATGCGTCAGGTTGGAGAC；

SIP -R：TCAATGCCAGCATCTCCGTT；

RSMG-F：AGTTCCTCATTCAGGCGAGC；

RSMG-R：ACCTGTCGCTTGCTCTCTTC。

3.適用于桑黃生長(zhǎng)發(fā)育研究的內(nèi)參基因的內(nèi)參引物的篩選方法，其特征在于包括如下步驟：

a)內(nèi)參基因的選擇：將桑黃的菌絲體、幼嫩子實(shí)體和成熟子實(shí)體分別進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，篩選出FPKM值＞100且在桑黃三個(gè)發(fā)育時(shí)期表達(dá)量無顯著性差異的基因作為候選內(nèi)參基因，以傳統(tǒng)內(nèi)參基因β-Actin作為對(duì)照，所述β-Actin內(nèi)參基因的核酸序列為No.1，候選內(nèi)參基因分別為SIP內(nèi)參基因、AH內(nèi)參基因、RSMG內(nèi)參基因和TRT內(nèi)參基因，其中，SIP內(nèi)參基因的核酸序列為No.2，AH內(nèi)參基因的核酸序列為No.3，RSMG內(nèi)參基因的核酸序列為No.4，TRT內(nèi)參基因的核酸序列為No.5；

b)實(shí)時(shí)熒光定量PCR：在候選內(nèi)參基因和傳統(tǒng)內(nèi)參基因的特異區(qū)段設(shè)計(jì)內(nèi)參引物，利用桑黃的三個(gè)發(fā)育時(shí)期樣本的cDNA作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR；

c)內(nèi)參引物的選擇：對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析，篩選出穩(wěn)定性好的內(nèi)參引物。

4.如權(quán)利要求3所述的適用于桑黃生長(zhǎng)發(fā)育研究的內(nèi)參基因的內(nèi)參引物的篩選方法，其特征在于：所述步驟b)中，采用Primer-BLAST在線網(wǎng)站設(shè)計(jì)候選內(nèi)參基因和傳統(tǒng)內(nèi)參基因的正向引物和反向引物，候選內(nèi)參基因和傳統(tǒng)內(nèi)參基因的正向引物和反向引物的核苷酸序列如下所示：

β-Actin-F：TCTGGTCGTACCACCGGTAT；

β-Actin-R：AAGTCCGTCAAGTCACGACC；

SIP-F：TCATGCGTCAGGTTGGAGAC；

SIP -R：TCAATGCCAGCATCTCCGTT；

AH-F：TAGAGGACGATGGACCCGTT；

AH-R：TTTCGACAATCCGACCCGAG；

RSMG-F：AGTTCCTCATTCAGGCGAGC；

RSMG-R：ACCTGTCGCTTGCTCTCTTC；

TRT-F：CAGATGTCTACGCCCTCGTC；

TRT-R：CCGGATCGATGCAAGATGGA。

5.如權(quán)利要求3所述的適用于桑黃生長(zhǎng)發(fā)育研究的內(nèi)參基因的內(nèi)參引物的篩選方法，其特征在于：所述步驟c)中，通過geNorm、NormFinder和BestKeeper三種軟件對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。