[發明專利]用于表達熒光蛋白的肉葡萄球菌質粒及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 202010854403.8
• 申請日: 2020-08-24
• 公開（公告）號: CN111979260A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 高強;安婭;王華敏;薛鮮麗
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N1/21;C12N15/66;C12Q1/02;C07K14/435;C12R1/44
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1.用于表達單體紅色熒光蛋白的肉葡萄球菌穿梭質粒pBT2，其特征在于熒光蛋白的編碼基因擁有啟動子與信號肽的控制。其中所述啟動子為ufA基因的啟動子Peftu片段(GenBank Accession No：7551602)，其中所述信號肽為來自肉葡基因組中的鐵離子依賴型的過氧化物酶(FepB or EfeB，Sca2214)中的Tat片段(GenBank Accession No：AM295250)，其中所述來源于S.hyicus subsp.hyicus DSM20459的脂肪酶基因shl的啟動子Sec片段(GenBank Accession No：LS483304.1)，其中所述單體紅色熒光蛋白為DsRed-Monomer(GenBank Accession No：AB711114.1)。所述穿梭質粒分別命名為pBT2-E-DsRed-M、pBT2-E-Tat-DsRed-M和pBT2-E-Sec-DsRed-M。所表達質粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3。

2.一種菌株，所述菌株包含權利要求1所述的穿梭質粒。

3.根據權利要求2所屬菌株，其中最優菌株為肉葡萄球菌TM300。

4.一種如權利要求1所述的表達質粒的構建方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)片段啟動子Peftu片段、信號肽Tat片段、信號肽Sec片段和DsRed-Monomer片段的PCR擴增、回收。

(2)對以上片段進行雙酶切。

(3)將雙酶切產物與載體pBT2依次連接，分別構建質粒pBT2-E-DsRed-M、pBT2-E-Tat-DsRed-M和pBT2-E-Sec-DsRed-M。

5.根據權利要求3所述用途，將所述構建質粒應用于表達熒光蛋白的肉葡萄球菌，應用于實時觀察、活體檢測。