[發(fā)明專利]全化學成分HEK293細胞培養(yǎng)基及其應用

有效

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• 申請日: 2020-08-21
• 公開（公告）號: CN114075540B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發(fā)明（設計）人: 陳宜頂;孟祥春
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州新微溪生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發(fā)明提供一種全化學成分HEK293細胞培養(yǎng)基及其應用。所述培養(yǎng)基包括氨基酸、無機鹽、維生素、微量元素、碳水化合物和有機分子。本發(fā)明的細胞培養(yǎng)基不含任何生長因子及其它蛋白添加物，無非化學成分界定組分；通過引入更多包括微量元素在內(nèi)的組分，替代一般培養(yǎng)基設計中所必需的生長因子，支持HEK293細胞的高密度和高活率生長。

技術領域

本發(fā)明涉及細胞培養(yǎng)技術領域，具體地說，涉及一種全化學成分HEK293細胞培養(yǎng)基及其應用。

背景技術

近年來，隨著基因工程技術的問世，培養(yǎng)基已被廣泛用于多種細胞和微生物培養(yǎng)，包括各種動物細胞、植物細胞、細菌、真菌和病毒等。生物制藥工業(yè)中的目標產(chǎn)物蛋白可以通過在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞而大量生產(chǎn)。這些細胞為天然的或工程化的細胞，利用發(fā)酵罐等設備在液體培養(yǎng)基中快速成倍增長，并生產(chǎn)目標產(chǎn)物。這些產(chǎn)物有的直接從培養(yǎng)基中收集，有的從收獲的細胞中提取獲得。培養(yǎng)基提供細胞培養(yǎng)過程中所需的營養(yǎng)物質(zhì)，在早期的細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基配方以血清的化學組成和物理化學性質(zhì)(如滲透壓、pH值等)為基礎。但不同類型的細胞在不同的培養(yǎng)環(huán)境中對于氧氣/二氧化碳分壓、營養(yǎng)物的需求有所不同，因此，培養(yǎng)基的配方取決于特定的細胞要求。一般而言，培養(yǎng)基的主要成分包括氨基酸、有機鹽、無機鹽、維生素、微量元素、碳源和其它有機分子等，各組分的濃度根據(jù)給定細胞的特定要求而相應調(diào)整。

自1990年開始出現(xiàn)無蛋白培養(yǎng)基PFM(含水解物)和完全化學成分限定培養(yǎng)基。從2000年以來，無動物源完全化學成分培養(yǎng)基持續(xù)優(yōu)化，用以支持細胞高密度培養(yǎng)和高產(chǎn)物表達。全化學成分限定培養(yǎng)基具有批間差異小、可重復性高，容易進行純化和下游加工，便于細胞功能的精確評估，減少抗生素使用量等優(yōu)勢。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種全化學成分(無血清無蛋白無動物源性)HEK293細胞培養(yǎng)基及其應用。

為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，第一方面，本發(fā)明提供一種全化學成分HEK293細胞培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包括氨基酸、無機鹽、維生素、微量元素、碳水化合物和有機分子；其中，氨基酸的組成及用量如下：

無機鹽的組成及用量如下：

微量元素的組成及用量如下：

維生素的組成及用量如下：

碳水化合物和有機分子的組成及用量如下：

優(yōu)選地，所述細胞培養(yǎng)基中：氨基酸的組成及用量如下：

無機鹽的組成及用量如下：

微量元素的組成及用量如下：

維生素的組成及用量如下：

碳水化合物和有機分子的組成及用量如下：

進一步地，所述全化學成分細胞培養(yǎng)基的pH值為6.9-7.1。

第二方面，本發(fā)明提供所述培養(yǎng)基的配制方法，包括：按比例稱取各組分，用水溶解，然后用水定容，并調(diào)pH至6.9-7.1。

第三方面，本發(fā)明提供所述培養(yǎng)基在哺乳動物細胞，特別是HEK293細胞或重組HEK293細胞體外培養(yǎng)中的應用。