[發明專利]一種鴨短喙侏儒綜合征蛋黃抗體的制備方法

在審

• 申請號: 202010850315.0
• 申請日: 2020-08-21
• 公開（公告）號: CN111925435A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 王宇鵬;程雪嬌;楊雪;孫珊珊;李麗琴;宋秀梅;石青青;王嵩
• 申請（專利權）人: 天津市中升挑戰生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/02
• 分類號: C07K16/02;C07K16/08;A61K39/42;A61P31/20
• 代理公司: 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226
• 代理人: 張會雪

本發明涉及一種鴨短喙侏儒綜合征蛋黃抗體的制備方法，包括如下步驟：1)、用鴨短喙侏儒綜合征滅活疫苗免疫產蛋雞，每隔14天加強免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取樣檢測，瓊擴效價達到1:32以上，留蛋使用；2)、進行蛋清蛋黃分離；3)、分離蛋黃加入7倍的去離子水稀釋、攪拌均勻；4)、調節混合后蛋黃液pH值到4.5，蛋黃溶液降溫到4℃；5)、離心，上清液即為提純后的卵黃抗體液體。本發明提取工藝制備用于鴨短喙侏儒綜合征預防、治療的卵黃抗體，生產時間短，工藝簡單，大大降低了人工成本和時間成本。克服了常用提取方法酸沉、辛酸除脂法的生產時間長(約48h?72h)，工藝復雜，成本高的缺點。

技術領域

本發明涉及生物制品制備領域；尤其涉及一種鴨短喙侏儒綜合征蛋黃抗體的制備方法。

背景技術

自2014年以來，一種由新型鵝源鴨源細小病毒(novel duck parvovirus，NDPV)引起的鴨病在國內部分鴨群中不斷發生。病鴨主要表現為鴨喙萎縮、舌頭腫脹脫出、跛行癱瘓，生長遲緩和侏儒癥，根據發病臨床特征將該病命名為鴨短喙-侏儒綜合征(duck shortbeak and dwarfism syndrome，DSBDS)。2014年以前，未見該病大面積發生與流行的報道，2014年后全國多地發生，并迅速蔓延，尤其是肉鴨養殖比較密集的地區，給我國養鴨業造成嚴重的經濟損失，現已引起高度的關注。該病可發生于多種肉鴨，如櫻桃谷鴨、半番鴨、番鴨、麻鴨、白鴨及褐萊鴨等。發病日齡在7～40日齡，日齡越小，發病率越高。發病率在5％～20％之間，嚴重者達40％左右，死亡率低于10％。該病既可垂直感染也可水平傳播。

卵黃抗體(Immunoglobulin of yolk,IgY):通過免疫接種產蛋母雞，即可由其生產的蛋黃中提取相應的抗體，并可用于相應疾病的預防和治療，這類制劑稱為卵黃抗體。禽類的免疫系統包括細胞免疫和體液免疫，分別受胸腺和法氏囊的控制。當機體受到外來抗原刺激后，法氏囊內的B細胞分化成為漿細胞，分泌特異性抗體進入血液循環，當血液流經卵巢時，特異性抗體在卵細胞中逐漸蓄積，形成卵黃抗體；當卵細胞分泌進入輸卵管時，流經輸卵管的血液中含有的特異性抗體(主要是IgA和IgM)進入卵清中，形成卵清抗體。血清抗體移行進入卵細胞是受體作用的結果，因而血清抗體可在卵細胞中大量蓄積，濃度高于血液中的抗體。與卵黃抗體相比，卵細胞在輸卵管中移行的時間較短，因而卵清抗體含量極微。卵黃抗體在禽胚孵化過程中逐漸進入禽胚血液，為剛出殼雛雞提供被動免疫保護，在雛雞疾病預防中具有重要作用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種針對新發的鴨短喙侏儒綜合征進行預防、治療的精制卵黃抗體的制備方法。這種卵黃抗體的制備方法比傳統酸沉、辛酸除脂需要時間更短，可更快速、更經濟的獲取卵黃抗體。針對鴨短喙侏儒綜合征的卵黃抗體可有效補充市場新發疾病相關治療、預防藥物的空白。

本發明采用的技術方案為：

一種用于鴨短喙侏儒綜合征預防、治療的卵黃抗體的制備方法，包括如下步驟：

1)、用鴨短喙侏儒綜合征滅活疫苗免疫產蛋雞，每隔14天加強免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取樣檢測，瓊擴效價達到1:32以上，留蛋使用；

2)、進行蛋清蛋黃分離；

3)、分離蛋黃加入7倍的去離子水稀釋、攪拌均勻；

4)、調節混合后蛋黃液pH值到4.5，蛋黃溶液降溫到4℃；

5)、離心，上清液即為提純后的卵黃抗體液體。

優選地，所述鴨短喙侏儒綜合征滅活疫苗的制備工藝為：將SBDS毒株用鴨胚成纖維細胞擴增，培養，然后濃縮，保證濃縮后病毒毒價均為1X10^7.0TCID₅₀以上，甲醛滅活，即為所需抗原(免疫用水相)；利用滅活疫苗一般制備工藝進行乳化，即得到鴨短喙侏儒綜合征滅活疫苗。