[發(fā)明專利]一種老年便秘動物模型的構(gòu)建及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010848248.9
• 申請日: 2020-08-21
• 公開（公告）號: CN111887203B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉曉節(jié);趙迪;趙思俊;李震宇;張麗增;秦雪梅
• 申請（專利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 太原晉科知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 翟沖燕

1.一種老年便秘動物模型的構(gòu)建，其特征在于：所述老年便秘動物模型為陽虛型老年便秘動物模型；每日對模型組大鼠皮下注射300 mg/kg的D-半乳糖，從第7周開始，按首劑量5 mL/只灌胃給予大鼠白醋，此后單雙日交替灌喂白醋和活性炭冰水混合物，白醋的劑量是3 mL/200g，活性炭冰水混合物的劑量是5 mL/200g；其中白醋的總酸度g/100g為6度，活性炭冰水混合物中含有16.67 mmol/L活性炭，連續(xù)5周；造模周期共為11周；

造模完成后，收集動物糞便進行核磁共振分析和多元統(tǒng)計分析，得到20生物標志物，具體為：Alanine、Asparagine、Aspartate、Betaine、Butyrate、Citrate、Creatinine、Glucose、Glutamate、Glutamine、Isobutyrate、Isoleucine、Lactate、Leucine、Methionine、Phenylalanine、Propionate、Pyruvate、Scyllo-Inositol、Threonine；

結(jié)合20個生物標志物的含量統(tǒng)計學(xué)分析，若模型大鼠血清中：

模型大鼠糞便中Betaine、Butyrate、Glucose、Scyllo-Inositol含量顯著下調(diào)，具體含量變化如下：

Betaine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.576916 ± 0.138669317下降到0.364879 ±0.055045628，P 0.001；

Butyrate的積分面積均數(shù)從正常鼠的2.054152125 ± 1.132002605下降到0.845627875 ± 0.406826504，P 0.05；

Glucose的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.163973388 ± 0.055315766下降到0.050115913 ± 0.033780499，P 0.001；

Scyllo-Inositol的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.237631667 ± 0.087895853下降到0.129596283 ± 0.025747797；P 0.05；

模型大鼠糞便中Alanine、Asparagine、Aspartate、Citrate、Creatinine、Glutamate、Glutamine、Isobutyrate、Isoleucine、Lactate、Leucine、Methionine、Phenylalanine、Propionate、Pyruvate、Threonine含量顯著上調(diào)，具體含量變化如下：

Alanine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.6795905 ± 0.115019777上升到1.2881475 ±0.177238037，P 0.001；

Asparagine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.232976833 ± 0.048197673上升到0.4311975 ± 0.158855282，P 0.05；

Aspartate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.035562423 ± 0.020726677上升到0.07794175 ± 0.029437469，P 0.001；

Citrate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.038760118 ± 0.021153991上升到0.075742038 ± 0.02374747，P 0.001；

Creatinine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.341087375 ± 0.078463115上升到0.460051625 ± 0.098886616，P 0.05；

Glutamate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.36414925 ± 0.079438783上升到0.566018875 ± 0.091630705，P 0.001；

Glutamine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.069941167 ± 0.021113785上升到0.123925833 ± 0.012650315，P 0.001；

Isobutyrate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.075706625 ± 0.032514476上升到0.115289063 ± 0.035502651，P 0.05；

Isoleucine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.27580575 ± 0.099119943上升到0.431931125 ± 0.077826814，P 0.01；

Lactate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.8101775 ± 0.338191577上升到1.20282325± 0.279287306，P 0.05；

Leucine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.79796525 ± 0.231204982上升到1.150439125± 0.181783288，P 0.001；

Methionine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.281667 ± 0.050065168上升到0.385737± 0.046516487，P 0.001；

Phenylalanine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.140056375 ± 0.018575142上升到0.193468 ± 0.022584819，P 0.001；

Propionate的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.066754333 ± 0.142348045上升到1.537661667 ± 0.331000035，P 0.05；

Pyruvate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.28044325 ± 0.063398877上升到0.422089375 ± 0.062680524，P 0.001；

Threonine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.785947 ± 0.120669645上升到1.26176 ±0.151115543，P 0.001；

則表明老年便秘動物模型造模成功，模型穩(wěn)定；

所述20個生物標志物獲取的具體方法為：在動物模型構(gòu)建完成后，分別收集空白對照組大鼠與模型組大鼠的糞便，并對其分別進行核磁共振分析，得到空白對照組與模型組大鼠的¹H NMR譜圖；使用MestReNova軟件對所有的¹H NMR譜圖進行總面積歸一化處理得到積分數(shù)據(jù)，然后對空白對照組與模型組大鼠的¹H NMR譜圖積分數(shù)據(jù)矩陣進行多元統(tǒng)計分析，得出空白對照組與模型組的大鼠糞便內(nèi)源性代謝物的輪廓圖，應(yīng)用多元統(tǒng)計分析方法對代謝輪廓進行表征，采用主成分分析法對數(shù)據(jù)進行代謝輪廓分析，考察各組數(shù)據(jù)分離情況，得到老年便秘大鼠模型的代謝輪廓圖和有顯著差異的生物標志物，結(jié)合統(tǒng)計學(xué)分析，得到空白對照組與模型組大鼠糞便生物標志物的積分均值及變化趨勢；

具體分析方法為：對核磁數(shù)據(jù)進行模式識別，得到空白對照組與模型組的主成分分析圖，即PCA圖，當(dāng)模型組偏離正常對照組，且兩組在第一主成分軸上的分離效果明顯，證明老年便秘模型構(gòu)建成功；

在PCA的基礎(chǔ)上，利用正交偏最小二乘-判別分析法和排列測試對正常對照組和模型組大鼠糞便進一步分析，測試驗證模型的適應(yīng)度和預(yù)測能力；

最后，利用變量重要性VIP值 1.0，S-plot相關(guān)性絕對值 0.58并結(jié)合統(tǒng)計學(xué)P 0.05獲得潛在的生物標志物；從對照組與模型組中找到含量變化顯著的變量，然后對空白對照組與模型組大鼠糞便進行核磁分析，并按照總面積歸一化積分的方法對得出核磁圖譜進行積分，得出20個生物標志物的含量變化。