[發明專利]增加細胞生長速率的無血清培養基

在審

• 申請號: 202010847561.0
• 申請日: 2020-08-21
• 公開（公告）號: CN111944740A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 喻志遠;王龍超;朱紹榮;張成林
• 申請（專利權）人: 上海榮盛生物藥業有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種增加細胞生產速率的無血清培養基，將第一培養基和第二培養基按比例混合。本發明提供的無血清培養基來源于對市面在售的兩款無血清培養基，對其進行改良，而適合于細胞無血清培養。通過對比使用改良前后培養細胞的生長增殖情況，發現改良后的培養基在促進細胞生長與細胞維持時間上有明顯的提高，適合細胞生長增殖。

技術領域

本發明涉及一種用于細胞培養的組合物，尤其涉及一種無血清培養基，用于提高細胞生長速率。

背景技術

動物細胞使用無血清培養基培養是當今生物工程領域的前沿科技，但市面上銷售的無血清培養基通常具有光譜性，對于一種細胞生長而言并非最佳。

CN110904025公開了一種Vero細胞的無血清懸浮馴化方法，步驟一，貼壁培養Vero細胞至匯合率達到80％時，棄上清液，加入無鈣鎂離子的D-PBS洗滌；步驟二，棄D-PBS，加入胰酶，棄胰酶消化液，殘留少許胰酶足以覆蓋細胞即可，孵育至細胞變圓或孵育一定時間后輕拍瓶底解離細胞；步驟三，用Vero-S懸浮無血清培養基重懸；步驟四，棄上清液，用 Vero-S懸浮無血清培養基重懸；步驟五，將細胞密度稀釋，接種到一次性搖瓶中培養；步驟六，當細胞密度達到3×10⁶/ml進行細胞傳代；步驟七，一旦連續10代以上細胞密度在48h 能達到3×10⁶/ml以上，細胞活率不低于95％，則認為此細胞適應了懸浮培養。

CN110951677公開了一種Vero細胞無血清培養基，包括基礎培養基DMEM/F12、1～10mg/L乙二胺四乙酸二鈉、5～30mg/L二水合乙醇胺鹽酸鹽、2～25mg/L乙二胺四乙酸鐵納、0.005～0.02mg/L重組表皮生長因子、1～10mg/L重組胰島素、0.1～5mg/L重組纖連蛋白、0.05～0.5mg/L亞油酸鈉、0.05～0.5mg/L肉豆蔻酸、0.05～0.8mg/L硬脂酸、6～80mg/L肌醇、 B61～10mg/L維生素和70.1～0.8mg/L維生素B。

CN110628697公開了一種用于VERO無血清細胞培養及相應病毒生產的無血清培養基，包括15-20mg/L甘氨酸、2-5mg/L丙氨酸、150-300mg/L鹽酸精氨酸、20-60mg/L一水天門冬酰胺、5-10mg/L天門冬氨酸、15-20mg/L一水鹽酸半胱氨酸、25-75mg/L二鹽酸胱氨酸、 5-10mg/L谷氨酸、100-200mg/L谷氨酰胺、20-40mg/L一水鹽酸組氨酸、25-75mg/L異亮氨酸、25-75mg/L亮氨酸、60-95mg/L鹽酸賴氨酸、50-75mg/L甲硫氨酸、20-40mg/L苯丙氨酸、 15-20mg/L脯氨酸、150-180mg/L絲氨酸、40-60mg/L蘇氨酸、5-10mg/L色氨酸、200-300mg/L 酪氨酸二鈉鹽二水合物、25-60mg/L纈氨酸、10-15mg/L羥脯氨酸、40-60mg/L鳥氨酸、 50-75mg/L牛磺酸、10-15mg/L人轉鐵蛋白、5-10mg/L重組胰島素、2000-4000mg/L4-羥乙基哌嗪乙磺酸、KERRY超濾植物蛋白胨100-500mg/L和安琪酵母粉100-500mg/L等。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種無血清培養基，以增加細胞生長速率。

本發明的另一個目的在于提供一種無血清培養基，以增加vero細胞生產速率。

一種無血清培養基，將第一培養基和第二培養基按重量比3∶1～4∶1混合。

第一培養基為：VirusPRO Vero-A，購自上海源培生物科技股份有限公司。

第二培養基為：Vero-SFM，購自天信和生物科技有限公司。

另一種無血清培養基，包括第一培養基、第二培養基、NaHCO₃、谷氨酰胺、胰島素和堿性成纖維細胞生長因子，第一培養基和第二培養基按比例混合。