[發明專利]一種抗人間充質干細胞衰老及增強其干性特征的方法

有效

• 申請號: 202010846598.1
• 申請日: 2020-08-21
• 公開（公告）號: CN111979187B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 肖建輝;羅熠;鐘建江;余昌胤
• 申請（專利權）人: 遵義醫科大學附屬醫院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/073;C12N5/078;C12N5/0786
• 代理公司: 遵義浩嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 52112
• 代理人: 李雪梅

本發明公開了一種抗人間充質干細胞衰老及增強其干性特征的方法，該方法通過人外周血中的免疫細胞與老化的人間充質干細胞以細胞與細胞接觸的方式培養，可顯著逆轉老化人間充質干細胞的衰老特征，包括減少β半乳糖苷酶、P21和P16蛋白等細胞衰老標志物的表達，同時可明顯調節老化人間充質干細胞的細胞周期，具體表現為減少處于G1期細胞數量，增加S期細胞數量。更重要的是，該方法可顯著增強老化人間充質干細胞的干性特征，如自我更新能力，增殖能力和多向分化潛能，且該培養方式所獲得的細胞用于治療疾病模型，安全有效。本發明可直接應用到人間充質干細胞長期體外擴增，解決擴增過程細胞老化問題，恢復細胞活力，提高臨床應用效果。

技術領域

本發明屬于干細胞與再生醫學領域，涉及到一種在長期體外擴增過程抗人間充質干細胞衰老及增強其干性特征的方法。

背景技術

近年來，間充質干細胞（mesenchymal stem cell, MSC）因其胚胎干細胞樣特性和旁分泌能力，在人類疾病治療中的地位和價值日益凸顯，成為干細胞與再生醫學的理想細胞來源(Arch Pharm Res. 2012;35:213- 21. )。據美國臨床試驗注冊中心記錄，用 MSC治療的疾病多達百余種，尤其是對難治愈性疾病展現出良好的應用前景（Stem Cells TranslMed 2019; 9:17-27.）。但是，來自人體組織的間充質干細胞數量極其有限，難以達到臨床最低治療劑量所需細胞數:每千克體重10⁶-10⁷個細胞，成年人每次治療劑量在10⁸-10⁹（Cytotherapy 2018; 21:289-36）。因此，體外擴增是解決MSC數量不足的主要途徑（NatBiomed Eng 2019; 3:90-104. ）。然而，長期體外培養引起MSC增殖潛能降低，最終導致其分裂停滯(Arch Pharm Res. 2009; 32: 117-26)，更重要的是受擴增環境應激損傷引起MSC衰老、以及MSC長期分裂增殖引起的增齡性衰老，導致細胞增殖分化基因蛋白發生變化，進而引起擴增的MSC自我更新、增殖能力、分化潛能、免疫調節、遷移與歸巢能力等優良生物學特質進行性喪失（Semin Immunol 2018, 40:101275；Trends Cell Biol 2018; 28:595-607）。而且，衰老細胞分泌大量的衰老相關分泌表型因子可致使周圍健康細胞衰老，衰老MSC輸注給患者直接影響干細胞的臨床治療效果，甚至引起免疫排斥、健康細胞癌變等潛在的治療風險（Semin Immunol 2018, 40:101275；Trends Cell Biol 2018; 28:595-607）。譬如，增齡性衰老使得MSC細胞因子和趨化因子受體（TNFR1，TNFR2，IL-6R）等的表達降低(Nat Med. 2009;15:42-9. )，從而使其在炎癥性疾病中的治療效果遠低于年輕的MSC(AmJRespir Crit Care Med. 2014;189:787-98 )。因此，在MSC的長期體外擴增所引發的細胞衰老問題，是MSC至今尚未實現規模化臨床應用的源頭性、基礎性的重要共性科學問題和主要瓶頸，這也是一個亟待解決的世界性難題。