[發明專利]BmKRP基因的dsRNA及其在害蟲防治中的應用

有效

• 申請號: 202010844278.2
• 申請日: 2020-08-20
• 公開（公告）號: CN112048506B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 鄧惠敏;朱子丹;童春梅;馮啟理
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N15/12;C12N5/10;C12Q1/6888;A01K67/033
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 景鵬

本發明涉及基因工程技術領域，特別涉及BmKRP基因的dsRNA及其在害蟲防治中的應用。本發明首次發現了BmKRP的缺失會影響了家蠶的雌性生殖，導致卵巢變小、卵母細胞體積變小及成蟲產卵數減少；并將其與BmKr?h1的調控聯系起來，推測BmKRP的突變缺失，影響了BmKRP與BmKr?h1啟動子上反應元件的結合，進而使得BmKr?h1不表達或者下調表達，同時也可能干擾了下游信號通路相關基因或營養相關通路基因的表達，進而影響家蠶卵巢發育和卵子生成。本發明結合RNA干擾技術，提供了針對BmKRP基因的dsRNA，也為益蟲利用和害蟲防治新靶標與新策略提供線索和理論指導，具有應用意義。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，特別涉及BmKRP基因的dsRNA及其在害蟲防治中的應用。

背景技術

家蠶是一種鱗翅目泌絲昆蟲，屬無脊椎動物，節肢動物門蠶蛾科蠶蛾屬桑蠶種。作為一種重要的經濟昆蟲，家蠶的絲具有很高的商業價值，不僅是珍貴的紡織原料，且在軍工、交電等方面也有廣泛用途，此外，家蠶的蛹、蛾和蠶砂也可綜合利用，是多種化工和醫藥工業的原料及植物的養料。在科研領域，家蠶作為在科研領域，家蠶作為鱗翅目的重要模式昆蟲，被廣泛用于研究昆蟲生殖遺傳與變態發育，從而掌握并利用其生長調控機制，最終達到農林業害蟲防治等效果。

RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指外源或內源的雙鏈RNA(double-strandedRNA,dsRNA)特異性地引起基因表達沉默的現象。RNAi作為研究功能基因組學的一個技術平臺，促進了昆蟲基因功能研究的革命。RNAi包括起始階段和效應階段；在RNAi起始階段，加入的雙鏈RNA被切割成21～23bp長的小分子干擾RNA片段(smallinterfering RNA,siRNA)。在效應階段，siRNA雙鏈結構結合一個核酶復合物，形成了RNA誘導的沉默復合物，其正義鏈被釋放出來后，反義鏈將作為引導鏈與靶mRNA作用。從而精確的降解與siRNA序列相同的mRNA，完全抑制該基因在細胞內的翻譯和表達。RNAi具有較高的特異性，能夠非常特異性地降解與之序列相應的單個內源基因的mRNA，且抑制基因表達效率很高，相對少量的dsRNA就可以使表型達到缺失突變體程度，RNAi基因表達的效應可以突破細胞界限，在不同細胞甚至生物體間長距離傳遞和維持，并可傳遞給下一代。

近年來，RNAi技術在田間作物保護中的應用成為了研究熱點。一方面，通過轉基因作物作為自身轉錄合成害蟲靶標基因的dsRNA，當害蟲生物取食轉基因作物時，引發害蟲體內發生RNAi，降低害蟲的取食能力。另一方面，以化學合成siRNA作為生物農藥。現有研究都表明了RNAi技術作為防治害蟲的方法是可行的。RNAi防治害蟲的效果依賴于高效的干擾片段和簡便的導入方法，篩選大量有效的靶標基因是RNAi應用于害蟲防治的基礎。因此，靶標基因的篩選、dsRNA的設計是害蟲防治的關鍵。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明基于一種新的靶標BmKRP(Bombyx mori Kr-h1 regulatory protein)基因，提供了其dsRNA，及在害蟲防治中的應用。

本發明的技術方案如下文所示。

本發明一方面提供了BmKRP基因，其中，所述BmKRP基因的核苷酸序列如SEQ IDNO：6所示。

本發明又一方面還提供了一種BmKRP基因的雙鏈RNA(dsRNA)分子，所述雙鏈RNA分子包括如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列和其反向互補序列所示的核苷酸序列。

根據本發明的一些實施方式，合成所述雙鏈RNA分子的引物包括序列如SEQ IDNO:2～3所示的引物對和如SEQ ID NO:4～5所示的引物對。

本發明還提供了一種核酸構建體，其包含如上所述的雙鏈RNA分子中的至少一條鏈。

本發明還提供了一種核酸分子，其編碼如上所述的雙鏈RNA分子中的至少一條鏈。