[發明專利]一種香豆素衍生物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010843342.5
• 申請日: 2020-08-20
• 公開（公告）號: CN111943923B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 王守信;劉兆明;盛筱;王慧云;丁林
• 申請（專利權）人: 濟寧醫學院
• 主分類號: C07D311/16
• 分類號: C07D311/16;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 陳啟天

本發明涉及一種香豆素衍生物及其制備方法和應用，涉及醫藥技術領域，一種香豆素衍生物，其結構式如式I所示：本公開的香豆素衍生物經TYR催化氧化后可生成一種在445nm處有最大熒光發射信號的代謝產物。其酶促反應具有選擇性好、靈敏度高、反應迅速、代謝產物易檢測、酶活及抑制活性評價快速高效等特點。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種香豆素衍生物及其制備方法和應用。

背景技術

酪氨酸酶(tyrosinase，TYR)是人體內一類介導黑色素合成的代謝酶，與多種疾病的發病過程有關。該酶的功能減退或缺失時，會導致白癜風或白化病等色素合成障礙性皮膚病；相反，若該酶的表達量過多，又可因黑色素生成旺盛而出現雀斑、暗沉、黃褐斑、老年斑等色素沉著癥狀。TYR在動植物體也有分布，參與動植物機體的褐變過程。另外，近年來有研究發現，惡性黑色素瘤患者體內TYR的含量異常升高，提示腫瘤部位TYR活性的高低與腫瘤的惡性化程度存在一定的關聯。綜上所述，建立一種快速靈敏的TYR 定量方法具有重要的理論意義和實用價值。

高效、廉價的TYR活性定量檢測方法一直是生物醫學研究者期望的。截至目前，已開發出的TYR定量方法有基于整個蛋白質結構特征或特異性肽段碎片特征的直接定量法，如酶聯免疫吸附法等，以催化代謝產物生成速率表示的活性定量法，如色譜法、比色法和放射法等。前一類方法雖然特異性較好，但需要價格昂貴的抗體、肽段或專門的儀器，且制備樣品的過程復雜耗時，更重要的是這類方法所測定的都是TYR總蛋白量而不是它的真實催化活性。后一類方法是以單位時間內TYR催化L-多巴或L-酪氨酸轉化生成相應代謝產物的數量來反應其催化活性，是一種目前被廣泛采用的定量方法。但由于其檢測過程是基于反應生成的代謝產物在特定波長處的紫外吸收信號，所以存在兩方面的問題，一是檢測靈敏度不高，二是在進行復雜多組分體系的抑制劑或激活劑篩選實驗時會存在較強的背景信號干擾，可能會在某種程度上對篩選結果的準確性造成不利影響。因此，開發一種基于新的檢測機制的定量方法顯得十分必要。與上述檢測方法相比，特異性熒光探針可以專一并實時地反映目標酶的活性，并可高效評估多種體內外因素對酶活的影響，從而實現對人體特定功能蛋白實時定量監測的目的。上述問題是本領域亟需解決的技術問題。

發明內容

本發明為了解決上述技術問題，提供了一種香豆素衍生物及其制備方法和應用。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：一種香豆素衍生物，其結構式如式I所示：

本發明的有益效果是：本發明提供了一種香豆素衍生物，其可以作為酪氨酸酶熒光探針底物，該香豆素衍生物經TYR催化氧化后可生成一種在445 nm處有最大熒光發射信號的代謝產物。其酶促反應具有選擇性好、靈敏度高、反應迅速、代謝產物易檢測、酶活及抑制活性評價快速高效等特點。

本申請還提供了一種上述香豆素衍生物的制備方法，包括以下步驟：

S1、將2-羥基-4-甲氧基苯甲醛、3,4-二羥基苯乙酸、三乙胺和乙酸酐混合并加熱至90～150℃進行反應，反應結束后提純后得到中間產物；

S2、將所述中間產物和丙酮和稀鹽酸混合，加熱至60～110℃進行反應，反應結束后提純得到所述香豆素衍生物。

本申請通過兩步即可制備得到上述香豆素衍生物，合成工藝簡單。

進一步的是，所述步驟S1中，反應時間為4～10h；所述步驟S2中，反應時間為3～8h。

進一步的是，所述步驟S1中，提純包括步驟：

將反應液冷卻至室溫，然后中和至pH為7～8，使用有機溶劑萃取，隨后減壓除去溶劑，得到所述中間產物；

所述步驟S2中，提純包括步驟：

將反應液倒入冰水浴中，過濾后洗滌得到粗產物，對所述粗產物進行純化，得到所述香豆素衍生物。