[發(fā)明專利]一種毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010842603.1
• 申請(qǐng)日: 2020-08-20
• 公開（公告）號(hào): CN112063582A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 單延紅;李珈瑩;郭華;于沛勇;張建中;劉瀟瀟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林省銀豐生物工程技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 長(zhǎng)春眾邦菁華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 于曉慶

一種毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，屬于生物領(lǐng)域，本發(fā)明的一種毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：步驟一、獲取原代毛囊組織塊；步驟二、將獲取的原代毛囊組織塊接種于細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)處理；步驟三、對(duì)擴(kuò)增的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)鑒定，結(jié)果顯示：(1)細(xì)胞貼壁；(2)細(xì)胞表型CD44⁺≥95％，CD105⁺≥95％，CD45⁺≤2％，CD34⁺≤2％；(3)可成脂、成骨、成軟骨。本發(fā)明能夠有效提高毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖，提高毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞在培養(yǎng)過程中的擴(kuò)增能力，取材方便，取材痛苦小、來源豐富、分離簡(jiǎn)單。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)最早發(fā)現(xiàn)于骨髓，現(xiàn)已被證實(shí)存在于機(jī)體的多種組織器官中，是一群具有多向分化潛能的多能干細(xì)胞。

牙髓、脂肪、外周血的間充質(zhì)干細(xì)胞或存在細(xì)胞數(shù)量少的問題，或存在有創(chuàng)的問題，或存在受身體健康情況限制的問題而無法實(shí)現(xiàn)自體間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用。因此，尋找新的間充質(zhì)干細(xì)胞并成功培養(yǎng)是非常必要的。

發(fā)明內(nèi)容

為克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明提供一種毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，以解決目前現(xiàn)有自體間充質(zhì)干細(xì)胞來源局限性的技術(shù)問題。

本發(fā)明的一種毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

步驟一、獲取原代毛囊組織塊；

步驟二、將獲取的原代毛囊組織塊接種于細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)處理；

步驟三、對(duì)擴(kuò)增的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)鑒定，結(jié)果顯示：(1)細(xì)胞貼壁；(2)細(xì)胞表型CD44⁺≥95％，CD105⁺≥95％，CD45⁺≤2％，CD34⁺≤2％；(3)可成脂、成骨、成軟骨。

作為優(yōu)選的實(shí)施方式，步驟一的具體操作步驟如下：

提取9個(gè)以上完整毛囊，清洗后用組織剪機(jī)械剪切成碎塊。

作為優(yōu)選的實(shí)施方式，步驟二中，所述細(xì)胞培養(yǎng)基為含有5％血清替代品的無血清培養(yǎng)基。

作為優(yōu)選的實(shí)施方式，步驟二中，所述細(xì)胞培養(yǎng)基中含有表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板源性生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板源性生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的含量比為1:1:1:1。

作為優(yōu)選的實(shí)施方式，所述表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板源性生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在細(xì)胞培養(yǎng)基中的含量均為10～25ng/ml。

作為優(yōu)選的實(shí)施方式，步驟二中，培養(yǎng)處理?xiàng)l件為：溫度為37℃，CO₂濃度為5％。

作為優(yōu)選的實(shí)施方式，步驟二中，培養(yǎng)處理過程中不使用胰酶或膠原酶，直接將獲取的原代毛囊組織塊接種于細(xì)胞培養(yǎng)基中。

作為優(yōu)選的實(shí)施方式，步驟二中，在培養(yǎng)處理過程中，原代組織塊7天之內(nèi)不做任何處理，第7天半量換液，第10天實(shí)現(xiàn)至少3個(gè)克隆細(xì)胞團(tuán)塊的爬出。第10天傳代，之后每隔三天傳代。

本發(fā)明還提供一種毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法所獲取的毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞。

本發(fā)明的有益效果是：

1、本發(fā)明提供一種新的毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞及其培養(yǎng)方法，能夠有效提高毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖。