[發(fā)明專利]一種雞毒支原體抗體檢測(cè)試劑及制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010841156.8
• 申請(qǐng)日: 2020-08-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111707822A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁美娟;候軍;周勇岐;朱曉瑋;尹秀鳳;張丹;汪愛(ài)芬;許秀梅;張小飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 兆豐華生物科技（南京）有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/531
• 代理公司: 常州佰業(yè)騰飛專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32231
• 代理人: 李嘉寧

1.一種雞毒支原體抗體檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）用雞毒支原體菌種按1:10比例接種雞毒支原體液體培養(yǎng)基，在37℃培養(yǎng)，待培養(yǎng)液pH值下降0.5，收獲作為一級(jí)種子液；以同樣方法將一級(jí)種子液按1:10的比例再接種傳代1次收獲作為二級(jí)種子液，測(cè)定其生長(zhǎng)滴度不低于10⁹CCU/mL；

（2）收獲培養(yǎng)好的雞毒支原體菌液，8000rpm，4℃離心20分鐘；

（3）棄去上清，用生理鹽水洗滌沉淀3次，最后根據(jù)菌體體積配成10~50倍濃縮抗原；

（4）冰浴中以超聲波間歇破碎裂解20分鐘，10000r/min離心30分鐘，取上清液，加入濃度為0.4%的甲醛溶液，37℃滅活；

（5）將步驟（4）制備的抗原液與凍干保護(hù)劑混合，然后經(jīng)真空冷凍干燥，制備成凍干型制劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞毒支原體抗體檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于：步驟（1）中所述雞毒支原體菌種為雞毒支原體滅活苗制備疫苗用菌株CR株。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雞毒支原體抗體檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于：步驟（5）中所述凍干保護(hù)劑為明膠、蔗糖、聚乙二醇、殼聚糖和甘露寡糖中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雞毒支原體抗體檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于：所述凍干保護(hù)劑的加入量為上述步驟（4）制備的抗原液的1/9~1/3。

5.權(quán)利要求1-4任一所述制備方法制得的雞毒支原體抗體檢測(cè)試劑。

6.權(quán)利要求5所述的雞毒支原體抗體檢測(cè)試劑在血凝抑制試驗(yàn)中的應(yīng)用，其特征在于：直接用試劑凍干劑量的2~3倍生理鹽水稀釋，按照OIE方法測(cè)定MG 的HA及待檢血清的HI。

7.權(quán)利要求5所述的雞毒支原體抗體檢測(cè)試劑在平板凝集試驗(yàn)中的應(yīng)用，其特征在于：用生理鹽水配制成4~8HA單位的抗原，添加終濃度為0.9mg/mL甲基紫、琥珀紅、結(jié)晶紫中的任意一種染色劑，即可進(jìn)行平板凝集試驗(yàn)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的雞毒支原體抗體檢測(cè)試劑在平板凝集試驗(yàn)中的應(yīng)用，其特征在于：所述任意一種染色劑在使用前，均先用100%乙醇溶液溶解。