[發明專利]一種定量DNA甲基化程度的電化學方法及系統

有效

• 申請號: 202010838165.1
• 申請日: 2020-08-19
• 公開（公告）號: CN112098489B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 孫經緯
• 申請（專利權）人: 孫經緯
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;C12Q1/6886
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝

1.一種DNA甲基化的電化學檢測方法，包括：

S1)獲取待測DNA樣本；

S2)將待測DNA樣本溶解于水性緩沖液中，得到DNA溶液；所述水性緩沖液為pH＝8.0的TE緩沖液；

S3)將電化學工作站的工作電極、參比電極和對電極浸沒于電解液中，確定吸附前的DPV電流峰值作為基線電流A0，所述電解液為添加有水溶性鐵氰化鹽和水溶性亞鐵氰化鹽的緩沖液；所述緩沖液為PBS緩沖液；

S4)將工作電極浸入所述DNA溶液中并充分吸附，測試吸附后的DPV電流峰值，記為樣本電流A1；

S5)根據基線電流A0和樣本電流A1，計算DNA甲基化程度；

其中，檢測過程中維持恒溫至15～25℃，所述工作電極為金電極；

所述金電極在使用前經過鋁粉進行打磨；

電化學工作站DPV模式的檢測參數為：t equilibration＝0s、E begin＝-0.1V、E end＝0.5V、E step＝0.005V、E pulse＝0.05V、t pulse＝0.05s、Scan rate＝0.05V/s、Current range＝1uA–1mA；

DNA電流吸附率的計算公式為：

當計算得到的DNA電流吸附率低于10％時，對樣本進行復核。

2.根據權利要求1所述的電 化學檢測方法，其特征在于：檢測過程中的溫度維持在20℃。

3.根據權利要求1所述的電 化學檢測方法，其特征在于：水溶性鐵氰化鹽選自[K₃Fe(CN)₆]、[Na₃Fe(CN)₆]；水溶性亞鐵氰化鹽選自[K₄Fe(CN)₆]或[Na₄Fe(CN)₆]。

4.根據權利要求1～3任一項所述的電 化學檢測方法，其特征在于：水溶性鐵氰化鹽和水溶性亞鐵氰化鹽的摩爾比為(0.95～1.05)：1。

5.根據權利要求4所述的電 化學檢測方法，其特征在于：水溶性鐵氰化鹽和水溶性亞鐵氰化鹽的摩爾比為1：1。

6.根據權利要求1～3任一項所述的電 化學檢測方法，其特征在于：使用磁珠吸附法提取獲得待測DNA樣本。

7.根據權利要求1～3任一項所述的電 化學檢測方法，其特征在于：所述待測DNA樣本包括血漿cfDNA樣本、組織DNA樣本。

8.一種腫瘤篩查系統，包括：

樣本DNA甲基化程度檢測裝置：采用 權利要求1～7任一項所述的方法，確定樣本DNA甲基化程度；

結果判斷裝置：基于樣本DNA甲基化程度，篩查惡性腫瘤。

9.根據權利要求8所述的腫瘤篩查系統，其特征在于：所述腫瘤選自肺癌、前列腺癌、乳腺癌、頭頸部鱗癌、食管癌、淋巴瘤、胃癌、白血病、胰腺癌、肝癌、腸癌、卵巢癌、子宮內膜癌、膽囊癌、宮頸癌。