[發明專利]一種磁微粒化學發光法檢測柯薩奇B組病毒IgM抗體的試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 202010833169.0
• 申請日: 2020-08-18
• 公開（公告）號: CN111999495A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 徐悅
• 申請（專利權）人: 北京貝爾生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/76;C07K14/085;C12N15/41
• 代理公司: 北京悅和知識產權代理有限公司 11714
• 代理人: 司麗春

本發明實施例涉及免疫檢測領域，具體涉及一種磁微粒化學發光法檢測柯薩奇B組病毒IgM抗體的試劑盒及其制備方法。所述試劑盒包括：酶標工作液、磁珠懸浮液、樣本稀釋液、校準品和發光底物液；其中，酶標工作液包括辣根過氧化物酶標記的柯薩奇B組病毒抗原，磁珠懸浮液包括偶聯有鼠抗人IgM抗體的磁微粒；所述柯薩奇B組病毒抗原包括重組抗原A、重組抗原B或重組抗原C中的一種或多種；所述重組抗原A的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示序列；所述重組抗原B的氨基酸序列包括SEQ ID NO.2所示序列；所述重組抗原C的氨基酸序列包括SEQ ID NO.3所示序列。本發明實施例提供的試劑盒，提高了靈敏度和線性范圍，且特異性、準確性好。

技術領域

本發明涉及免疫檢測領域，具體涉及一種磁微粒化學發光法檢測柯薩奇B組病毒IgM抗體的試劑盒及其制備方法。

背景技術

柯薩奇病毒是非常嚴重的人類疾病的致病病原，1948年由Dolldorf和Sickles在美國紐約Coxsackie鎮從臨床診斷為脊髓灰質炎的患者糞便標本中分離出來的一組病毒,屬小RNA病毒,可引起從上呼吸道到中樞神經系統感染的許多疾病。該病毒分為A、B兩組，其中柯薩奇B組(Coxsackievirus group B，CVB)病毒屬于小RNA病毒科的腸道病毒屬，有6個血清型，是引起人類病毒性心肌炎、無菌性腦膜炎和新生兒全身性感染等疾病的主要病原，可在世界各地散發或暴發流行，近年來其發病呈顯著上升趨勢。故重視柯薩奇病毒感染的多樣性和早期診斷柯薩奇病毒感染不容忽視。

目前臨床和科研用柯薩奇B組病毒診斷主要包括病原學診斷、分子生物學診斷及免疫學診斷等，病原學診斷主要通過細胞培養的方法分離鑒定臨床尿液、血液等標本中的病原體，病原學診斷具有較高的特異性，技術操作難度大，操作繁瑣，分離周期較長，主要應用在科研教學方面，并不適合大規模，快速，準確的臨床檢測需求，有一定條件限制，而且耗時較長。分子生物學主要檢測病原體核酸，該方法對標本的采集要求嚴格，如時間、部位等，并對實驗技術要求較高，容易產生假陽性結果。免疫學診斷主要檢測血清中的抗體，包括膠體金法、酶聯免疫吸附法。膠體金法一般通過手工進行實驗操作，最終通過肉眼進行定性判定，該技術靈敏度低，易出現假陽性，人為主觀因素影響較大，酶聯免疫吸附法的靈敏度較膠體金法有所提升，但仍然較低，并且線性范圍窄，反應時間也較長，仍然不能很好滿足臨床的應用。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

發明目的

為解決上述技術問題，本發明的目的在于提供一種磁微粒化學發光法檢測柯薩奇B組病毒(CVB)IgM抗體的試劑盒及其制備方法。本發明實施例提供的試劑盒，使用磁微粒化學發光法檢測柯薩奇B組病毒IgM抗體，與傳統的膠體金法和酶聯免疫吸附法相比，提高了靈敏度和線性范圍，且特異性、準確性好。本發明的試劑盒，酶標工作液中HRP上標記的是經過特別選擇的柯薩奇B組病毒基因工程抗原，提高了試劑盒的反應的靈敏度；磁微粒上標記的是鼠抗人IgM單克隆抗體，可提高試劑盒的特異性。

解決方案

為實現本發明目的，本發明實施例提供了一種試劑盒，所述試劑盒包括：酶標工作液、磁珠懸浮液、樣本稀釋液、校準品和發光底物液；

其中，酶標工作液包括辣根過氧化物酶標記的柯薩奇B組病毒抗原，

磁珠懸浮液包括偶聯有鼠抗人IgM抗體的磁微粒；

所述柯薩奇B組病毒抗原包括重組抗原A、重組抗原B或重組抗原C中的一種或多種；

所述重組抗原A的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示序列；