[發明專利]一種磁微粒化學發光法檢測腺病毒IgM抗體的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 202010833152.5
• 申請日: 2020-08-18
• 公開（公告）號: CN111999494B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 徐悅
• 申請（專利權）人: 北京貝爾生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/76;C07K14/075;C12N15/34
• 代理公司: 北京悅和知識產權代理有限公司 11714
• 代理人: 司麗春

1.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

校準品、樣本稀釋液、酶標工作液、磁珠懸浮液和發光底物液；

其中，所述酶標工作液包括下述終濃度的組分：牛血清白蛋白2-5g/L，新生牛血清80-120mL/L，氯化鈉5-10g/L，磷酸氫二鈉4-8g/L，磷酸二氫鈉0.4-1g/L和辣根過氧化物酶標記的腺病毒抗原0.8-1.2μg/mL；

磁珠懸浮液包括偶聯有鼠抗人IgM抗體的磁微粒；

所述腺病毒抗原包括重組抗原A；

所述重組抗原A的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示序列；

所述磁微粒使用碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺活化，且每100mL磁微粒使用1mL含有濃度為4.80-5.20mg/mL的碳二亞胺和2.3-2.7mg/mL的N-羥基琥珀酰亞胺的活化劑活化。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，編碼重組抗原A的核苷酸序列包括SEQID NO.4所示序列。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，磁珠懸浮液包括下述終濃度的組分：偶聯有鼠抗人IgM抗體的磁微粒，以磁微粒的質量計，0.8-1.2mg/mL，其中，1mg磁微粒上偶聯有30-50μg的鼠抗人IgM抗體；

和/或，磁微粒為超順磁性微粒。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，校準品包括腺病毒IgM抗體；

和/或，樣本稀釋液為pH值為7.0-7.2的生理鹽水；

和/或，發光底物液包括發光底物液A和發光底物液B，發光底物液A包括魯米諾或魯米諾鈉鹽；化學發光底物液B包括過氧化脲。

5.利用權利要求1所述的試劑盒的組分制備磁微粒化學發光法檢測腺病毒IgM抗體試劑盒的制備方法。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，磁珠懸浮液的制備方法包括下述步驟：將磁微粒用碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺活化后，加入鼠抗人IgM抗體。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，磁珠懸浮液的制備方法包括下述步驟：

取100mg磁微粒，磁分離去上清，用10mL偶聯緩沖液重懸，磁分離去上清，重復數次，置換磁微粒液體環境；向去上清的磁微粒加入9mL偶聯緩沖液重懸，再加入1.0mL新配制的含有濃度為4.80-5.20mg/mL的碳二亞胺和2.3-2.7mg/mL的N-羥基琥珀酰亞胺的偶聯緩沖液，室溫振蕩混懸，使磁珠充分活化；磁分離，去上清，用偶聯緩沖液重懸，加入3.5-4mg鼠抗人IgM抗體，使磁微粒濃縮液總體積為10mL，2-8℃振蕩混懸8-12h；磁分離，去上清，用10mL儲存液重懸，室溫條件下混勻，再磁分離，去上清，重復數次，清洗磁微粒液體環境中游離抗體；向去上清的磁微粒加入10mL儲存液重懸；室溫條件下混勻后，使超聲，將聚集成團的磁珠分散成單顆粒狀態；

室溫條件下混勻后，加入儲存液90mL，得到所述磁珠懸浮液；

其中，偶聯緩沖液包括下述終濃度的組分：2-嗎啉乙磺酸3-3.5g/L，pH 5.90-6.10；

儲存液包括下述終濃度的組分：Tris 1-1.3g/L，NaCl 8.5-9g/L，牛血清白蛋白0.8-1.2g/L，pH 7.30-7.50。

8.權利要求1所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括下述步驟：

將校準品梯度稀釋；在全自動化學發光儀的反應杯中，每孔分別加入樣本稀釋液，校準品或待測樣本，磁珠懸浮液，酶標工作液和發光底物液；檢測發光強度，輸出檢測結果；

計算：以校準品發光強度RLU值建立定標曲線，將待測樣本的RLU值代入定標曲線中計算待測樣本中腺病毒IgM抗體的含量。