[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒抗體膠體金免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010831512.8
• 申請(qǐng)日: 2020-08-18
• 公開（公告）號(hào): CN112305218A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔大祥;田靜;梁輝;李雪玲;王侃;劉巖磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海納米技術(shù)及應(yīng)用國(guó)家工程研究中心有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532;G01N33/52
• 代理公司: 上海東亞專利商標(biāo)代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

1.一種膠體金免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)新型冠狀病毒抗體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

金標(biāo)抗體偶聯(lián)物的制備，采用抗人IgG/M/A的多克隆抗體偶聯(lián)膠體金；

病毒抗體捕獲用抗原混合液制備，所述的病毒抗體捕獲用抗原包括新型冠狀病毒S蛋白、N蛋白、E蛋白或者新型冠狀病毒S蛋白、N蛋白、E蛋白的活性片段；

將待測(cè)樣品分別與金標(biāo)抗體偶聯(lián)物和病毒抗體捕獲用抗原混合液反應(yīng)；

待測(cè)樣品與新冠病毒抗原反應(yīng)呈陽(yáng)性，表明待測(cè)樣本中含有新冠病毒抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)新型冠狀病毒抗體的方法，其特征在于，所述的多克隆抗體是抗人IgG多克隆抗體、抗人IgA多克隆抗體或者抗人IgM多克隆抗體種的一種或者幾種，獲得此抗體的免疫原為人IgG、IgM、和IgA，因此該類抗體與人IgG、IgM、和IgA都有特異性反應(yīng)。

所述的多克隆抗體是抗人IgG多克隆抗體、抗人IgA多克隆抗體或者抗人IgM多克隆抗體種的一種或者幾種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)新型冠狀病毒抗體的方法，其特征在于，所述的多克隆抗體是山羊抗人的抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)新型冠狀病毒抗體的方法，其特征在于，所述的抗原在抗原混合液中的終濃度為1mg/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的膠體金免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)新型冠狀病毒抗體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

待測(cè)樣品與金標(biāo)抗體反應(yīng)結(jié)果為陽(yáng)性、但是與新冠病毒抗原反應(yīng)結(jié)果為陰性，則檢測(cè)樣品中不含有新冠病毒抗體；

待測(cè)樣品與金標(biāo)抗體反應(yīng)結(jié)果為陽(yáng)性、并且與新冠病毒抗原反應(yīng)結(jié)果為陽(yáng)性，則檢測(cè)樣品中含有新冠病毒抗體；

待測(cè)樣品與金標(biāo)抗體反應(yīng)結(jié)果陰陽(yáng)性，則檢測(cè)失敗或者檢測(cè)試劑失效。

金標(biāo)抗體與C線二抗反應(yīng)結(jié)果陰陽(yáng)性，則檢測(cè)失敗或者檢測(cè)試劑失效。

6.一種金標(biāo)抗體偶聯(lián)物，其特征在于，所述的金標(biāo)抗體偶聯(lián)物包括抗人的多克隆抗體和膠體金，膠體金與抗人的多克隆抗體偶聯(lián)。

7.權(quán)利要求6所述的金標(biāo)抗體偶聯(lián)物的應(yīng)用，其特征在于，所述的金標(biāo)抗體偶聯(lián)物用于制備新型冠狀病毒的檢測(cè)試劑盒或者識(shí)別新型冠狀病毒的抗體。

8.一種檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的檢測(cè)試紙主體包括上樣墊、結(jié)合墊、吸收墊和反應(yīng)膜；

所述的檢測(cè)試紙包括金標(biāo)抗體偶聯(lián)物，所述的金標(biāo)抗體偶聯(lián)物采用抗人的多克隆抗體偶聯(lián)膠體金；

所述的檢測(cè)試紙還包括病毒抗體捕獲用抗原，所述的病毒抗體捕獲用抗原與反應(yīng)膜固定連接。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)試紙的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

上樣墊預(yù)處理： 在含吐溫和疊氮鈉的緩沖液中浸泡、烘干，備用；

結(jié)合墊預(yù)處理： 在含牛血清白蛋白或吐溫、疊氮鈉的硼酸緩沖液中浸泡、烘干，備用；

制備新型冠狀病毒抗原混合液：將新型冠狀病毒S蛋白和/或N蛋白、或者其活性片段，用緩沖液制成抗原混合液；

制備反應(yīng)膜：將新型冠狀病毒抗原混合液和抗山羊IgG/G/M抗體分別固定在反應(yīng)膜上。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)試紙的應(yīng)用，其特征在于，將新型冠狀病毒抗原混合液固定在反應(yīng)膜檢測(cè)線T區(qū)，將抗山羊IgG/M的抗體固定在反應(yīng)膜對(duì)照線C區(qū)，用于檢測(cè)待測(cè)樣品中新型冠狀病毒抗體；

測(cè)試結(jié)果判定方法為：

陰性結(jié)果：僅在對(duì)照線C區(qū)處出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)果，檢測(cè)線T區(qū)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)果，表明待測(cè)樣本中不含有新型冠狀病毒抗體；

陽(yáng)性結(jié)果：在對(duì)照線C區(qū)和檢測(cè)線T區(qū)各出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)果，表明待測(cè)樣本中含有新型冠狀病毒抗體；

無效結(jié)果：當(dāng)對(duì)照線C區(qū)未出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)果，表明測(cè)試失敗或試劑失效。