[發(fā)明專利]一種檢測新型冠狀病毒的基因芯片和試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010831056.7
• 申請日: 2020-08-18
• 公開（公告）號: CN112029904A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王麗玲;肖杰;余義文;胡榮;宋家武
• 申請（專利權(quán)）人: 珠海賽樂奇生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6837
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 鄭晨鳴

本發(fā)明屬于體外基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種檢測新型冠狀病毒的基因芯片和試劑盒。所述檢測新型冠狀病毒的基因芯片，包括生物傳感器及固定在生物傳感器上的檢測探針；所述檢測探針包括ORF1ab探針和N探針，其序列依次為SEQ ID NO.1?2。本發(fā)明可集成核酸擴增與芯片雜交過程，無需PCR儀的變溫步驟，同時不受到實驗室條件的限制，從而實現(xiàn)檢測的快速簡便。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于體外基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種檢測新型冠狀病毒的基因芯片和試劑盒。

背景技術(shù)

冠狀病毒屬于套式病毒目、冠狀病毒科、冠狀病毒屬，是一類具有囊膜、基因組為線性單股正鏈的RNA病毒，是自然界廣泛存在的一大類病毒。某些冠狀病毒會感染人類并引起疾病，比如中東呼吸綜合征(MERS)和嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)。

而2019新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)是2019年在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株。該病毒癥狀一般為發(fā)熱、乏力、干咳、逐漸出現(xiàn)呼吸困難，嚴(yán)重者表現(xiàn)為急性呼吸窘迫綜合征，膿毒癥休克，難以糾正的代謝性酸中毒和凝血功能障礙等。

新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒是用于對(口)咽拭子、鼻(咽)拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液或其他呼吸道分泌物等樣本中的新型冠狀病毒核酸進行體外定性檢測的體外診斷試劑。

最常用的核酸特異基因檢測法主要有(RNA恒溫擴增-金探針層析法)和實時熒光逆轉(zhuǎn)錄PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))法(實時熒光RT-PCR)。

1.RNA恒溫擴增-金探針層析法

采集咽拭子標(biāo)本，對標(biāo)本中的脫落細胞進行裂解，裂解釋放出的病原體RNA在逆轉(zhuǎn)錄酶和T7 RNA聚合酶的作用下，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄過程，實現(xiàn)病毒RNA的T7核酸擴增。擴增產(chǎn)物加入30ul新型冠狀病毒檢查液中，與特異探針雜交，最后，將混合液全部滴加至檢測卡樣孔內(nèi)，通過層析顯色讀取結(jié)果。

2.實時熒光PCR

實時熒光PCR是一種快速簡便、成本較低、且已在臨床廣泛使用的感染性病原體核酸檢測技術(shù)。新型冠狀病毒屬RNA病毒，PCR擴增前需要先進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(RT)，商品化試劑盒通常把RT反應(yīng)液與PCR反應(yīng)液預(yù)混在一起，一次性完成逆轉(zhuǎn)錄和擴增檢測的全部過程，操作簡便且明顯降低逆轉(zhuǎn)錄后開蓋易導(dǎo)致污染的風(fēng)險。實時熒光定量RT-PCR技術(shù)已被廣泛運用，獲批的檢測試劑生產(chǎn)廠家很多，產(chǎn)能也基本滿足實際需求，但該方法需要BSL-2級及以上實驗室、實時熒光定量PCR儀等苛刻條件和昂貴設(shè)備，且檢測周期較長(3-4小時)。

因此，本發(fā)明希望提供一種檢測新型冠狀病毒的基因芯片和試劑盒，可集成核酸擴增與芯片雜交過程，而無需PCR儀的變溫步驟和不受到實驗室條件的限制，從而實現(xiàn)檢測的快速簡便。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明提出一種檢測新型冠狀病毒的基因芯片和試劑盒，可集成核酸擴增與芯片雜交過程，無需PCR儀的變溫步驟，同時不受到實驗室條件的限制，從而實現(xiàn)檢測的快速簡便。

一種檢測新型冠狀病毒的基因芯片，包括生物傳感器及固定在生物傳感器上的檢測探針；所述檢測探針包括ORF1ab探針和N探針，其序列依次為SEQ ID NO.1-2。

ORF1ab基因和N基因均屬于新型冠狀病毒靶點基因，針對上述兩種基因分別設(shè)計探針，可提高檢測的準(zhǔn)確性。即使用該基因芯片進行檢測時，只有兩種探針均檢測到有效信號才能判定待測物中含有新型冠狀病毒核酸。

優(yōu)選的，所述檢測探針的5’端設(shè)置有6-20個單核苷酸組成的重復(fù)序列。所述重復(fù)序列包括但不限于以下類型：AAAAAAA、AAAAAAAAAAA、TTTTTTTTTTTTTTTTT。通過加入重復(fù)序列，避免檢測探針序列與芯片結(jié)合后，位置太近，影響探針與目標(biāo)DNA發(fā)生雜交反應(yīng)。