[發明專利]脂蛋白A亞型KIV-2結構域的拷貝數量檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202010827038.1
• 申請日: 2020-08-17
• 公開（公告）號: CN111763715A
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 沈林;李文濤;高鵬飛;楊敬敏;何方;郭志晨;張貝
• 申請（專利權）人: 上海韋翰斯生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種從基因水平檢測Apo A分子KIV?2亞型結構域的重復數檢測的試劑盒及其檢測方法。本發明的試劑盒采用基因合成的方法合成KIV?2已知重復數的標準品，解決了無陽性樣本或者樣本樣本量有限的確定；采用SYBR Green qPCR檢測方法，能夠高靈敏和特異性的檢測總量≥1ng的基因組DNA，在1?2內天快速得到結果。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種從基因水平檢測Apo A分子KIV-2亞型結構域的重復數檢測的試劑盒及其檢測方法。

背景技術

脂蛋白a(Lp(a))一種特殊的脂蛋白顆粒，血清Lp(a)濃度主要由基因控制，可作為動脈硬化性心腦血管疾病的獨立危險因素指標。其結構在蛋白質方面與LDL很相似，但帶有一個富含糖類和高度親水性的載脂蛋白Apo(a)蛋白。Apo(a)蛋白中kringle4-2型結構域重復序列的數量由基因決定，每個Apo(a)粒子的KIV-2型重復數型重復數從3到40不等，因此Apo(a)的大小不僅在個體間且在同一個體都是高度可變的。

研究kringle4-2型重復數、Lp(a)濃度與疾病相關性。現有方法主要通過實時熒光定量PCR檢測，檢測已知KIV-2型重復數樣本與待測樣本KIV-2型重復數，計算出待測樣本KIV-2型重復數。此方法需要有已知KIV-2型重復數的情況下才能檢測，所以沒有陽性樣本則無法開展相關實驗，并且陽性樣本量無法實現量產。

因此，提供一種從基因水平檢測Apo A分子KIV-2亞型結構域的重復數檢測的試劑盒及其檢測方法具有重要的現實意義。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種檢測KIV-2結構域的重復數量的診斷試劑盒及其制備方法、檢測方法。通過基因合成標準品，解決了標準品差異較大，提高了檢測方法的準確度等；通過qPCR及設計特異性引物提高了檢測的靈敏度及特異性問題。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了引物組合，其特征在于，包括組合一和組合二：

組合一：

(1)、上游引物具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；和

(2)、下游引物具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；或

(3)、如(1)或(2)所示的核苷酸序列經取代、缺失或添加一個或多個堿基獲得的核苷酸序列，且與(1)或(2)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

(4)、與(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；

組合二：

(5)、上游引物具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；和

(6)、下游引物具有如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；或

(7)、如(5)或(6)所示的核苷酸序列經取代、缺失或添加一個或多個堿基獲得的核苷酸序列，且與(5)或(6)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

(8)、與(5)或(6)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列。

在本發明的一些具體實施方案中，所述取代、缺失或添加一個或多個中的多個為2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個。

本發明還提供了所述的引物組合在制備檢測KIV-2結構域的重復數量的試劑和/或試劑盒中的應用。

在上述研究的基礎上，本發明還提供了所述的引物組合在制備檢測動脈硬化性心腦血管疾病的試劑和/或試劑盒中的應用。