[發(fā)明專(zhuān)利]鼠單抗IgG2a F(ab`)2的制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010825924.0 | 申請(qǐng)日： | 2020-08-17 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN111876460A | 公開(kāi)（公告）日： | 2020-11-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊俊華;張春鴿;趙巧輝;李桂林;祝艷云;付光宇;吳學(xué)煒;楊增利 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 鄭州伊美諾生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12P21/06 | 分類(lèi)號(hào)： | C12P21/06;C07K16/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/16;G01N33/531 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 鼠單抗 igg2a ab 制備 方法 | ||
1.鼠單抗IgG2a F(ab')2的制備方法，其包括：
步驟1：IgG2a亞型鼠單抗經(jīng)透析后，以Bromelain酶解；
步驟2：終止酶解反應(yīng)后，再次透析，透析液上Protein A親和層析柱，收集含有鼠單抗IgG2a F(ab')2的流穿液；
步驟3：將流穿液過(guò)Superdex 200 Increase10/30GL柱，用3～5倍柱體積平衡緩沖液洗脫，收集含F(xiàn)(ab')2的洗脫液；
其中，所述Bromelain酶解以L-Glutathione激活酶解反應(yīng)；
所述平衡緩沖液0.02mol/L，pH值為7.0～7.5的PBS緩沖液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1中所述透析的透析液中包含水和50mmol/L Tris、2mmol/L EDTA。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述Bromelain酶解中，Bromelain酶與IgG2a亞型鼠單抗的質(zhì)量比為1:(50～75)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述以L-Glutathione激活酶解反應(yīng)中，L-Glutathione的濃度為1mmol/L；
所述Bromelain酶解的條件為37℃～38℃，100～150rpm振蕩反應(yīng)3～4h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述終止酶解反應(yīng)采用終止液，所述終止液為T(mén)PCK，TLCK或烷化劑中的任意一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2中所述透析的透析液為0.02mol/L，pH值為7.0～7.5的PBS緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，還包括將所述洗脫液濃縮到濃度為5mg/ml。
8.權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述方法制備的鼠單抗IgG2a F(ab')2。
9.含有權(quán)利要求8所述鼠單抗IgG2a F(ab')2的檢測(cè)試劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測(cè)試劑，其特征在于，其還包括保護(hù)劑和防腐劑。
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