[發(fā)明專利]一種依克多因的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010825850.0
• 申請日: 2020-08-17
• 公開（公告）號: CN111965281A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 唐毓萍;孫曉梅;鮑熹珺;李慧良
• 申請（專利權(quán)）人: 華熙生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 北京唐頌永信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

本發(fā)明提供一種依克多因的檢測方法，所述方法包括使用高效液相色譜法對依克多因進行檢測，所述高效液相色譜法的色譜條件如下：色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相包括流動相A和流動相B，所述流動相A是甲醇，所述流動相B是磷酸二氫鈉溶液。本發(fā)明提供的依克多因的檢測方法操作簡單、檢測時間短、分離效果好、精密度和準確度高、節(jié)省溶劑、樣品制備便捷、能夠用于快速準確檢測依克多因。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及高效液相色譜檢測領(lǐng)域，且更為具體地涉及一種依克多因的檢測方法。

背景技術(shù)

依克多因(Ectoine)，又稱四氫嘧啶(化學名為1，4，5，6-四氫-2-甲基-4-嘧啶羧酸，英文名為1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidinecarboxylic acid)，是一種環(huán)狀氨基酸衍生物，它能在高鹽、熱變性、干燥、冰凍等極端環(huán)境下，被用作酶、核酸、膜及細胞的保護劑及穩(wěn)定劑，因此在酶劑生產(chǎn)、醫(yī)學、保健食品以及化妝品工業(yè)等領(lǐng)域具有廣泛的應用前景。

目前，依克多因的檢測方法主要是采用高效液相色譜法，但是它一種強烈的親水性物質(zhì)，在常規(guī)的色譜條件或常規(guī)反相色譜柱上的保留很弱，其應用范圍主要在原料或水質(zhì)中，對于基質(zhì)比較復雜的化妝品領(lǐng)域還未有報道。其中，李耀東、龍啟福、李文軍等的高效液相色譜檢測青海湖嗜鹽菌胞內(nèi)積聚的相溶物質(zhì)四氫嘧啶一文采用乙腈/甲醇(V/V,95:5)EClipse XDB-C18柱(150×4.6mm)，柱溫20℃，流速1.0mL/min，檢測波長204nm等色譜條件分析Ectoine，文獻中指出該色譜條件下Ectoine的保留時間為1.400-1.429min，從文獻結(jié)果及色譜柱特性可知被分析物在該色譜條件及色譜柱上并未保留。賀冰,陶萍,陳愛連等的親水相互作用色譜法測定中度嗜鹽菌中四氫嘧啶和羥基四氫嘧啶一文中采用親水性色譜柱Merck-SeQuant ZIC-HILIC(150×4.6mm，5μm)，流動相乙腈:0.3％磷酸二氫鈉緩沖液(pH5)＝80：20(V/V)，流速1mL/min，檢測波長210nm，柱溫30℃條件下分析，其四氫嘧啶保留時間在12分鐘以上，時間較長，且分析成本較高。專利CN108120792A也公開了一種四氫嘧啶的高效液相檢測及含量測定方法，該專利中采用Shiseido CAPCELL PAK ADME(250×4.6mm，5μm)色譜柱，流動相為甲醇/20mM磷酸二氫鉀水溶液(磷酸調(diào)pH至3.0)＝5/95(V/V)，柱溫為30℃，流速為1mL/min，檢測波長為204nm等色譜條件對四氫嘧啶進行檢測，該專利中四氫嘧啶的保留時間為3.739min，從其結(jié)果可知，被分析物在色譜柱上的保留也不是很理想，且該專利中的色譜柱為非常規(guī)分析色譜柱，成本較高。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的依克多因檢測方法的不足。本發(fā)明通過選擇合適的色譜條件，提供一種依克多因的檢測方法。

具體來說，本發(fā)明涉及如下的技術(shù)方案：

1、一種依克多因的檢測方法，其特征在于，包括使用高效液相色譜法對依克多因進行檢測，所述高效液相色譜法的色譜條件如下：

色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；

流動相包括流動相A和流動相B，所述流動相A是甲醇，所述流動相B是磷酸二氫鈉溶液。

2、根據(jù)項1所述的依克多因的檢測方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷鍵合硅膠柱為Poroshell 120EC-C18色譜柱。

3、根據(jù)項1或2所述的依克多因的檢測方法，其特征在于，所述色譜柱的柱長為50-250mm，優(yōu)選為100-250mm。

4、根據(jù)項1-3任一項所述的依克多因的檢測方法，其特征在于，所述磷酸二氫鈉溶液還包含1-庚烷磺酸鈉，其中所述磷酸二氫鈉溶液中磷酸二氫鈉的濃度為5-100mM，優(yōu)選為10-50mM，所述磷酸二氫鈉溶液中1-庚烷磺酸鈉的濃度為1-20mM，優(yōu)選為5-15mM。