[發(fā)明專利]一組鱖鱸彈狀病毒的LAMP檢測引物組及其應用、一種檢測試劑盒

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• 申請日: 2020-08-17
• 公開（公告）號: CN112063750A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設計）人: 趙哲;周國勤;喻飛;郝凱;夏思瑤;陸健;陳樹橋;王紹綿
• 申請（專利權）人: 河海大學;南京市水產科學研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

本發(fā)明公開了一組鱖鱸彈狀病毒的LAMP檢測引物組及其應用、一種檢測試劑盒，引物組包括一對外引物、一對內引物和一對環(huán)引物；外引物包括L?F3序列和L?B3序列，外引物L?F3序列如SEQ ID NO:1所示，外引物L?B3序列如SEQ ID NO:2所示；內引物包括L?FIP序列和L?BIP序列，內引物L?FIP序列如SEQ ID NO:3所示，內引物L?BIP序列如SEQ ID NO:4所示；環(huán)引物包括L?LF序列和L?LB序列，環(huán)引物L?LF序列如SEQ ID NO:5所示，環(huán)引物L?LB序列如SEQ ID NO:6所示。并提供該引物組在制備鱖鱸彈狀病毒檢測試劑盒中的應用及試劑盒。本發(fā)明的引物組和試劑盒具有操作簡單、檢測快速、特異性好、靈敏度高和結果可靠等優(yōu)點。

技術領域

本發(fā)明涉及一組LAMP檢測引物組及其應用、一種檢測試劑盒，尤其涉及一組鱖鱸彈狀病毒的LAMP檢測引物組及其應用、一種檢測試劑盒。

背景技術

彈狀病毒(Rhabdovirus)是一類有囊膜的負鏈RNA病毒，具有較強的致病性且宿主范圍廣泛，可感染包括哺乳動物、鳥類、爬行動物、魚類、昆蟲以及植物等在內多種生物。魚類彈狀病毒是硬骨魚類病毒中數量最多的群體之一，到目前為止已經分離鑒定近二十種魚類彈狀病毒，如：鱖魚彈狀病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)、加州鱸彈狀病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV)，而它們通常與水產養(yǎng)殖的流行病及重大經濟損失有關。

鱖(翹嘴鱖)和鱸(加州鱸)是重要的淡水名特優(yōu)養(yǎng)殖品種，它們肉質細嫩，味道鮮美，蛋白質含量高而深受廣大消費者的青睞。但由于養(yǎng)殖規(guī)模的擴大及養(yǎng)殖密度的提高，加之水環(huán)境的污染，病害問題日益凸顯出來。彈狀病毒病是鱖、鱸養(yǎng)殖過程中常見幾種病毒性疾病之一，主要危害養(yǎng)殖鱖鱸幼魚，魚苗的死亡率可達30％～50％；近幾年也屢有發(fā)現對魚種也能導致發(fā)病且出現大批量死亡，給鱖鱸養(yǎng)殖經濟帶來嚴重損失。研究發(fā)現，鱖魚彈狀病毒SCRV和加州鱸彈狀病毒MSRV有較近的親緣關系，在序列同源性上高達96％以上。

目前，對鱖魚和加州鱸鱸彈狀病毒的檢測方法主要依賴于傳統(tǒng)的PCR方法，此方法雖然能提供準確可靠的檢測結果，但需要昂貴的儀器設備、較高檢測費用以及對檢測人員較高的技術要求而使其不適用于鱖魚和鱸魚養(yǎng)殖現場的大規(guī)模篩選使用和推廣。

發(fā)明內容

發(fā)明目的：本發(fā)明的第一目的為提供一組快速、特異檢測L基因的存在的鱖鱸彈狀病毒的LAMP檢測引物組，本發(fā)明的第二目的為提供該LAMP檢測引物組在制備鱖鱸彈狀病毒檢測試劑盒中的應用，本發(fā)明的第三目的為提供一種鱖鱸彈狀病毒的檢測試劑盒。

技術方案：本發(fā)明的鱖鱸彈狀病毒的LAMP檢測引物組，引物組包括一對外引物、一對內引物和一對環(huán)引物；

外引物包括L-F3序列和L-B3序列，外引物L-F3序列如SEQ ID NO:1所示，外引物L-B3序列如SEQ ID NO:2所示；

內引物包括L-FIP序列和L-BIP序列，內引物L-FIP序列如SEQ ID NO:3所示，內引物L-BIP序列如SEQ ID NO:4所示；

環(huán)引物包括L-LF序列和L-LB序列，環(huán)引物L-LF序列如SEQ ID NO:5所示，環(huán)引物L-LB序列如SEQ ID NO:6所示。

進一步地，外引物、內引物與環(huán)引物的摩爾比為0.8～1.2:6～9:3～5。

本發(fā)明的鱖鱸彈狀病毒的LAMP檢測引物組在制備鱖鱸彈狀病毒檢測試劑盒中的應用。

本發(fā)明的鱖鱸彈狀病毒的檢測試劑盒，試劑盒包括引物組。

優(yōu)選的，試劑盒還包括逆轉錄酶、DNA聚合酶、LAMP反應液、陽性對照品、陰性對照品和顯色劑。DNA聚合酶為Bst DNA聚合酶。