[發明專利]用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的標記物組合、方法及系統

在審

• 申請號: 202010818877.7
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN112014562A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 陳洪雷;楊雨寒;趙晨;袁毓;田素芳
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 薛玲

1.一種用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的標記物組合，其特征在于：所述標記物組合由PD-1、PD-L1、CD3、CD8、CD68和CK組成。

2.一種用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的方法，其特征在于：包括如下步驟：

1)收集免疫治療前后的石蠟包埋腫瘤樣本；

2)利用多色免疫熒光組織化學技術檢測用于評估免疫治療療效的標記物組合；所述標記物組合由PD-1、PD-L1、CD3、CD8、CD68和CK組成；

3)利用Vectra自動多光譜定量病理圖像分析系統采集多標記的實驗結果并詳細分析PD-1/PD-L1相關的免疫表型；所述定量病理圖像分析系統包括PerkinElmer多光譜成像設備和inForm2.4圖像定量分析軟件；

4)根據所獲得以上結果，提交PD-1/PD-L1表達狀態的分子報告。

3.根據權利要求2所述用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的方法，其特征在于：所述步驟1)中的腫瘤樣本包括均處于中晚期的肺癌、惡性黑色素瘤、尿路上皮癌、腎癌、胰腺癌、乳腺癌、頭頸部和胃腸道肝膽系統的惡性腫瘤細胞。

4.根據權利要求2或3所述的用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的方法，其特征在于：所述步驟2)中，多色免疫熒光組織化學技術依次檢測相應的PD-1/PD-L1免疫檢查點和淋巴細胞、巨噬細胞標記物；在檢測過程中，需要注意抗體和不同熒光染料的最佳搭配以及檢測順序。

5.根據權利要求2或3所述的用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的方法，其特征在于：所述步驟3)中，采用PerkinElmer多光譜成像設備和inForm2.4圖像定量分析軟件詳細分析PD-1/PD-L1相關的免疫表型，在陰性對照和陽性對照的協助下，可完成每個指標的單通道分析，腫瘤與間質區域的區分，組織分割、細胞分割以及感興趣免疫表型的新發現及定量獲取。

6.根據權利要求4所述的用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的方法，其特征在于：所述步驟3)中，采用PerkinElmer多光譜成像設備和inForm2.4圖像定量分析軟件詳細分析PD-1/PD-L1相關的免疫表型，在陰性對照和陽性對照的協助下，可完成每個指標的單通道分析，腫瘤與間質區域的區分，組織分割、細胞分割以及感興趣免疫表型的新發現及定量獲取。

7.根據權利要求2或3或6所述的用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的方法，其特征在于：所述步驟4)中，提交PD-1/PD-L1表達狀態的分子報告，在完成每個指標的詳細分析中，對比免疫治療前后的樣本，對獲取的PD-1/PD-L1相關的免疫表型和細胞毒性T細胞的改變，提交分子報告。

8.一種用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的系統，其特征在于：包含如權利要求1所述的標記物組合；或者采用如權利要求2或3或6所述的用于免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測的方法，以實現免疫檢查點PD-1/PD-L1動態監測功能。