[發明專利]一種水稻條紋病毒雙抗體夾心酶聯免疫檢測試劑盒及制備與檢測方法

在審

• 申請號: 202010816312.5
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN112014559A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 張坤;莊新建;陳佳歡;徐紅梅;賀振;劉芳
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/535;C07K16/10;C07K16/06
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 劉艷艷

本發明公開了一種水稻條紋病毒雙抗體夾心酶聯免疫檢測試劑盒及制備與檢測方法，測試劑盒包括ELISA用微孔板，酶標抗體，緩沖液，顯色液，終止液，其中微孔板上包被有氨基酸序列SEQ ID No.3所示的RSV NCP特異性多克隆抗體，酶標抗體為辣根過氧化物酶標記得RSV NCP特異性多克隆抗體。本發明采用的免疫原為基因工程表達的NCP外殼蛋白抗原，在血清學水平上為RSV的檢測提供了一種快速、靈敏、簡便的方法，不僅經濟實用，也為后續水稻的田間種植及其病毒病的防控提供一定的有效方法。

技術領域

本發明屬于植物病毒檢測的生物技術產品技術領域，具體涉及一種水稻條紋病毒雙抗體夾心酶聯免疫檢測試劑盒及制備與檢測方法。

背景技術

水稻條紋病毒(Rice stipe virus,RSV)最早于1897年在日本關東地區被發現。RSV通過灰飛虱(Laodelphax striatellus)以持久循回增殖的方式傳播，且可以通過昆蟲經卵傳遞給下一代。感染RSV的水稻病株經常出現褪綠的條紋斑點或斑塊，一般最早出現在嫩葉，根據病株表現癥狀可以分為卷葉型和展葉型兩類。

水稻條紋病毒是纖細病毒屬(Tenuivirus)的典型成員，RSV是屬于單鏈RNA病毒，其基因組含有4條RNA鏈，分別為RNA1、RNA2、RNA3和RNA4。RNA1具有負極性特征，其基因組互補鏈編碼337kDa的病毒復制酶，而RNA2、RNA3和RNA4具有雙義極性，其病毒基因組鏈vRNA和vcRNA各編碼1個蛋白，分別稱之為NS2、NSvc2、NS3、NCP、SP(Disease-specific Protein)及MP(Movement Protein)。NCP作為其外殼蛋白，有助于病毒在昆蟲體內的擴散。RSV主要分布于中國16個省市，病情嚴重的稻區甚至顆粒無收,給中國水稻生產造成嚴重損失。因此，發展RSV的快速檢測鑒定技術迫在眉睫，目前還沒有關于RSV NCP特異性抗血清報道，無法利用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測RSV NCP。

發明內容

目的：為了克服現有技術中存在的不足，本發明提供一種水稻條紋病毒雙抗體夾心酶聯免疫檢測試劑盒及制備與檢測方法。

技術方案：為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

一種水稻條紋病毒雙抗體夾心酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括RSV NCP特異性多克隆抗體，RSV NCP特異性多克隆抗體包被于多克隆抗體包被板上。

所述RSV NCP特異性多克隆抗體的免疫原氨基酸序列為：

MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSEFELMGTNKPATLADLQKAINDISKDALSYLTAHKADVVTFAGQIEYAGYDAATLIGILKDKGGDTLAKDMTMCITMRYVRGTGFVRDVTKKVKVAAGSTEASTLVSRYGIVSSVGTNANAITLGRLAQLFPNVSHEVVRQISGVKMAVDSSDLGLTGCDNLLWDYVPQYIKLESETAPYCTTHSLSHILFVVHIIHSFQITKKTMPEGKKKERGLTKDIDMMKYTTGLLVITCKSKNLADKKKEDGRKKVLDEFITNGKVKTTIFDALAGMSVNTISTYGNQTRLYLAQQSKLMKILAENTSKTASEVSGLVKEFFEDEAEGADDLEHHHHHHDPAANKARKEA(SEQ ID No.3)。

所述試劑盒還包括辣根過氧化物酶標記多克隆抗體、基因工程重組RSV外殼蛋白標準品、質控品。進一步的，還包括輔助試劑：提取反應液、洗滌緩沖液、酶緩沖液、顯色劑及反應終止液。

前述檢測試劑盒的制備方法，包括基因工程重組RSV外殼蛋白標準品的制備步驟、特異多克隆抗體的制備步驟、RSV多克隆抗體包被板的制備步驟、辣根過氧化物酶標多克隆抗體的制備步驟、質控品的制備以及輔助試劑的制備步驟。