[發明專利]一種異位處理禽畜糞污的專用菌劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202010815807.6
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN112080442A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 潘高尚;潘高志
• 申請（專利權）人: 上海原本生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C05F17/20;C05F17/80;C12R1/07;C12R1/125;C12R1/01
• 代理公司: 上海匯齊專利代理事務所(普通合伙) 31364
• 代理人: 朱明福

1.一種異位處理禽畜糞污的專用菌劑，其特征在于，包括以下質量份數的原料：重金屬鈍化菌3-5份、芽孢桿菌4-6份、草分枝桿菌3-8份、枯草芽孢桿菌6-10份、糞腸球菌8-15份、深海紅螺菌10-20份、就地堆肥地芽孢桿菌2-6份、誘導劑10-25份、穩定劑30-50份。

2.根據權利要求1所述的一種異位處理禽畜糞污的專用菌劑，其特征在于，所述誘導劑為木糖、酒石酸鉀鈉和MgSO₄中的一種或者數種。

3.根據權利要求1所述的一種異位處理禽畜糞污的專用菌劑，其特征在于，所述穩定劑為經121℃高溫滅菌的麥飯石。

4.一種異位處理禽畜糞污的專用菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下具體步驟：

S1，重金屬鈍化菌株選育：

a、從重金屬污染農田中采集土壤，過200目篩，取0.1-0.2g土壤，放入盛有90mL無菌水的三角瓶，150-200rpm震蕩1h，制成土壤懸液；

b、制備含重金屬離子的篩選培養基YEP：其中YEP培養基由牛肉粉3g，蛋白胨10g，酵母粉10g，氯化鈉2g，維生素VB₁₀10mg，瓊脂粉12g，純水1000mL制成，121℃滅菌20min，每升YEP培養基中加入1-10mL初始濃度為10000ppm的CdCl₂溶液，K₂Cr₂O₇溶液，PbCl₂溶液和CuCl₂溶液，調節Cd²⁺，Cr₂O₇^2-，Pb²⁺和Cu²⁺終濃度為10-100ppm，倒平板，冷卻；

c、吸取1mL土壤懸液，采用滅菌水梯度稀釋10¹-10⁹倍，分別吸取各稀釋度土懸液0.1mL，均勻涂布于Cd²⁺，Cr₂O₇^2-，Pb²⁺和Cu²⁺終濃度為10-100ppm的YEP培養基固體平板，28℃恒溫培養2-3d；

d、待平板上長出單菌落后，挑取單菌落至Cd²⁺，Cr₂O₇^2-，Pb²⁺和Cu²⁺終濃度為10-100ppm的YEP培養基固體平板，劃線培養。重復此步驟，連續劃線純化3-4次，直至獲得對Cd²⁺，Cr₂O₇^2-，Pb²⁺和Cu²⁺均具有一定耐受性的純菌；

e、獲得的純菌進行保存；

S2，功能菌株單株發酵：將芽孢桿菌、草分枝桿菌、枯草芽孢桿菌、就地堆肥地芽孢桿菌、糞腸球菌和深海紅螺菌六株菌株分別單獨進行發酵，獲得發酵菌液，具體如下：

芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和就地堆肥地芽孢桿菌，采用改良LBG培養基培養24-36h，接種量為1％-2％，搖床轉速為180-200rpm；

糞腸球菌采用MRS培養基培養24-36h，接種量為1％-2％，搖床轉速為180-200rpm；

草分枝桿菌采用培養基培養24-36h，接種量為1％-2％，搖床轉速為180-200rpm；

深海紅螺菌采用改良紅螺菌培養基培養24-36h，接種量為1％-2％，搖床轉速為180-200rpm；

S3，復合菌液制備：上述各單菌株發酵結束后，將芽孢桿菌、草分枝桿菌、枯草芽孢桿菌、就地堆肥地芽孢桿菌、糞腸球菌和深海紅螺菌六株菌株新鮮發酵液按照1-3:5-8:4-7:6-8:1-2:2-3的體積比混合，制得復合菌液，其中有效活菌數為1.9×10⁹-3.1×10⁹cfu/ml；

S4，新鮮培養基添加：按質量濃度0.5％-1.5％向復合菌液中加入新鮮培養基質-甘蔗糖蜜，其含糖分50％以上，錘度Bx85％以上；

S5，誘導劑添加：按質量濃度0.1-1％向S3中得到的復合菌液中加入木糖、酒石酸鉀鈉和MgSO₄中的一種或者數種，振蕩培養1-2h；

S6，穩定劑添加：按質量濃度1％-3％向S4中得到的復合菌液中加經121℃高溫滅菌的麥飯石，攪拌均勻，即可制得可以有效鈍化糞污重金屬的異位發酵床專用菌劑。