[發(fā)明專利]適用于糞腸球菌増菌的培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010812905.4
• 申請(qǐng)日: 2020-08-13
• 公開（公告）號(hào): CN112011483B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林永康;曹洪亮;趙鵬博;宋迪;郭芳坤;丁仁濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東天潤(rùn)和生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/46
• 代理公司: 北京智橋聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11560
• 代理人: 江莉莉

1.適用于糞腸球菌増菌的培養(yǎng)方法，包括以下的步驟：

（1）在1份甘草飲片中加入7份水回流提取50min，過濾，獲得一次提取液和一次濾渣；再在一次濾渣中加入5份水回流提取50min，過濾，獲得二次提取液和二次濾渣；最后在二次濾渣中加入5份水回流提取50min，過濾，收集三次提取液；將一次提取液、二次提取液和三次提取液合并，靜置5h，棄沉淀，收集上清液，減壓濃縮至其重量的55%，得甘草提取物；

（2）準(zhǔn)備糞腸球菌一級(jí)發(fā)酵用MRS液體培養(yǎng)基1L，于121℃滅菌20min；

（3）準(zhǔn)備二級(jí)菌種用培養(yǎng)基和發(fā)酵用培養(yǎng)基：二級(jí)菌種用培養(yǎng)基為100L，發(fā)酵用培養(yǎng)基為4300L；所述培養(yǎng)基的配方如下：蔗糖1.5份，酵母膏0.4份，魚粉1.8份，番茄汁8份，微量元素溶液1份，水90份，甘草提取物8份；微量元素溶液組成為MgSO₄·7H₂O 0.5%，MnSO₄·4H₂O2%，ZnSO₄·7H₂O 0.5%；10%氫氧化鈉調(diào)pH值至7.0，于121℃滅菌20min；

（4）糞腸球菌保存菌種復(fù)蘇傳2代，用MRS液體培養(yǎng)基洗下菌苔，加入到冷卻至38.0℃的一級(jí)菌種瓶，于37.5℃培養(yǎng)16h，發(fā)酵4h后每隔2h震搖培養(yǎng)瓶一次，每次震搖1min；得一級(jí)菌種；將一級(jí)菌種接種于滅菌好的二級(jí)種子罐，于37.5±1℃下培養(yǎng)17h，發(fā)酵4 h后每2 h啟動(dòng)一次攪拌，每次1min，得二級(jí)菌種；

（5）在發(fā)酵罐中加入（3）中的發(fā)酵用培養(yǎng)基，然后將二級(jí)菌種接種至發(fā)酵罐，于37.5±1℃培養(yǎng)16h，發(fā)酵4 h后每2 h啟動(dòng)一次攪拌，每次攪拌1min，培養(yǎng)24 h，當(dāng)pH值降至5.6時(shí)，在攪拌的同時(shí)流加質(zhì)量濃度為12.5%氨水將發(fā)酵罐內(nèi)pH值調(diào)至7.0；發(fā)酵結(jié)束前3小時(shí)停止添加氨水；

（6）在（5）中的發(fā)酵液中加入5wt%的糊精溶解，用冷卻水降溫至17℃,于進(jìn)風(fēng)溫度170℃、出風(fēng)溫度75℃的條件下進(jìn)行噴霧干燥，獲得糞腸球菌干燥菌粉。