[發明專利]Garcinone E在制備腫瘤細胞自噬小體誘導劑中的應用

在審

• 申請號: 202010810601.4
• 申請日: 2020-08-11
• 公開（公告）號: CN112107573A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 劉夏;馮世秀;尹富強;董彩華;雷順媚
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61P35/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 陳潔娣;劉明星

本發明公開了Garcinone E在制備腫瘤細胞自噬小體誘導劑中的應用。本發明首次發現Garcinone可以有效誘導鼻咽癌和卵巢癌細胞自噬小體增多，誘導鼻咽癌細胞中自噬標志蛋白LC3A/B?I和LC3A/B?II表達水平升高，p62表達水平降低。而與Garcinone E有相同母環結構且對腫瘤細胞增殖活力有抑制作用的陰性對照化合物Garcinone C不誘導鼻咽癌和卵巢癌細胞自噬小體數量增多，誘導卵巢癌細胞自噬相關蛋白Beclin?1、LC3A/B?II和Atg7等蛋白表達水平升高，LC3A/B?I表達量不升高。提示Garcinone E可在制備新型自噬小體誘導劑用于抗腫瘤研究中發揮重要作用。

技術領域

本發明屬于細胞自噬技術領域，具體涉及Garcinone E在制備腫瘤細胞自噬小體誘導劑中的應用。

背景技術

Garcinone E(分子式C₂₈H₃₂O₆，分子量464.55008，CAS號112649-21-5)是從山竹果皮中提取的氧雜蒽酮類單體化合物，研究顯示其具有抗腫瘤效果。目前Garcinone E在腫瘤尤其是卵巢癌方面的相關研究較少，對腫瘤細胞自噬小體的誘導未見報道。Garcinone C(分子式C₂₃H₂₆O₇，分子量414.44834，CAS號76996-27-5)也是從山竹果皮中提取的氧雜蒽酮類單體化合物，與Garcinone E有相同的母環結構，研究顯示其對部分腫瘤細胞的增殖活力有顯著抑制作用，也具有抗腫瘤效果。

細胞自噬(autophagy)又稱為II型程序性細胞死亡，是指隔離膜包裹細胞質和或細胞器等待降解物形成自噬小體，然后與溶酶體融合形成自噬溶酶體以降解其所包裹的內容物，最終實現細胞本身代謝需要和細胞器更新的過程。在正常的生理情況下，因為哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)的抑制作用，細胞保持基礎的自噬活性。但當應激事件如營養缺乏、低氧應激和藥物誘導等情況發生時，細胞自噬將被激活以維持細胞穩態。在腫瘤細胞自噬研究中經常需要觀察腫瘤細胞中自噬小體的數量，市面上常用的陽性對照自噬小體誘導方法主要有利用饑餓培養條件(如EBSS饑餓培養基)誘導、自噬誘導劑雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)誘導、溶酶體抑制劑氯喹(chloroquine,CQ)等。但我們在實際實驗過程中發現這類增加自噬小體數量的誘導方法并不具有通用性，針對不同的腫瘤細胞，需要對試劑處理濃度和時間進行大量的摸索，才能找到適宜的陽性對照試劑及其劑量和處理時間。例如，我們在進行鼻咽癌和卵巢癌細胞自噬研究過程中，針對鼻咽癌細胞HK1、HONE1和卵巢癌細胞HeyA8、SKOV3，嘗試使用EBSS、Rapa和CQ來誘導自噬小體，結果發現EBSS和Rapa的誘導效果都不好，僅有CQ處理可觀察到自噬小體增多的陽性結果。如果能夠找到更多新型的自噬小體誘導劑，必將有助于腫瘤自噬研究。

發明內容

本發明的第一個目的是提供Garcinone E在制備腫瘤細胞自噬小體誘導劑中的應用。所述的Garcinone E的結構如式(I)所示：

進一步的，所述的腫瘤為鼻咽癌或卵巢癌。

本發明通過使用濃度為5μM和10μM的Garcinone E處理鼻咽癌細胞HK1和HONE148h，處理卵巢癌細胞HeyA8 72h、SKOV3 48h，研究Garcinone E對腫瘤細胞自噬小體的誘導能力，結果表明，Garcinone E顯著誘導鼻咽癌細胞HK1、HONE1和卵巢癌細胞HeyA8、SKOV3自噬小體數量增多。

本發明的第二個目的是提供Garcinone E在制備增加自噬囊泡數量的制劑中的應用。

本發明的第三個目的是提供Garcinone E在制備促進LC3A/B-I和LC3A/B-II蛋白表達的制劑中的應用。