[發明專利]木霉菌Azaphilones類次級代謝產物的應用

在審

• 申請號: 202010806890.0
• 申請日: 2020-08-12
• 公開（公告）號: CN111944840A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 沈其榮;張建;龐冠;于振中;李榮
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N15/80
• 分類號: C12N15/80;C12N15/66;C12N15/65;C12N15/31;C12N1/15;C12P17/12;C12R1/885
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

本發明公開了木霉菌Azaphilones類次級代謝產物的應用。木霉菌Azaphilones類次級代謝產物在制備抗氧化劑中的應用。一種工程菌株，其特征在于將以hph為篩選標記，Pcdna1為強啟動子過量表達tgaza5的重組質粒轉化SQR?T037野生型菌株所得。所述的工程菌株在制備所述的木霉菌Azaphilones類次級代謝產物中的應用。本發明鑒定了一種azaphilones類新型抗氧化劑及其衍生物，并解析其合成基因簇，在醫用和農用新藥物或者藥物中間體的開發、生產中有重要的價值。

技術領域

本發明涉及木霉菌Azaphilones類次級代謝產物的應用，屬于應用微生物技術領域。

技術背景

隨著連作年限的增加，土傳有害真菌在土壤中的積累，給農業生產造成了極大的損失，如尖孢鐮刀菌侵染引起的黃瓜和番茄枯萎病就是一種非常嚴重的土傳病害(陳雪麗等， 2008)。相對抗病品質的選育和化學防控，生物防治具有環境友好、安全無毒等優點收到農業生產和研究的重視。其中，木霉屬真菌已廣泛用于多種植物真菌病害的防治，是一種較理想的生防真菌和植物促生菌(Plant Growth Promoting Fungus，PGPF)，占據重要的市場份額。但是，在實際應用中，木霉菌生物防治效果不穩定、持久性差、生防菌難定殖等不利因素也限制其更大規模的推廣應用。理論研究上，目前國內外對木霉菌的促生機制和生防機制已經進行了大量的研究，但整體理論研究還處于不斷完善的階段，尤其對其次級代謝產物的功能、合成機制和應用研究鮮有深入的研究報道。

真菌次級代謝產物根據生物合成來源主要分為聚酮類(由聚酮合酶PolyketidesSynthases，PKS合成)、非核糖體多肽類(非核糖體多肽合成酶Non-ribosomal peptidesSynthases，NRPS合成)、萜類(萜類合成酶Terpenoids Synthases，TS合成)和生物堿類；此外還有一類聚酮合酶-非核糖體多肽合成酶(PKS-NRPS)合成，能夠催化結合來源廣泛的聚酮骨架和氨基酸生成結構豐富多樣和生物活性物質廣泛的天然產物。從已公布12株木霉菌基因組序列中，通過anti-SMASH鑒定出含有豐富的次級代謝產物合成基因簇，已經鑒定出10-25個PKS，12-34個NRPS，6-14個TS和1-4個PKS-NRPS。目前，木霉次生代謝產物相關研究集中在物質結構鑒定及其體外功能驗證，而大多數產物的生物合成途徑以及生物學功能仍未可知。研究木霉次生代謝產物的生物合成途徑及其具體的生態功能有助于更好地改造和應用這些活性天然產物，對木霉及其次生代謝產物在農業生產應用中具有重要的理論價值和實踐意義。

哈茨木霉SQR-T037(菌種保藏號CGMCC No.3308)是本課題組分離、篩選獲得的一株生防木霉，能夠拮抗多種植物病原真菌，并作為生物有機肥中的功能菌廣泛應用于農業生產中。經過分析SQR-T037基因組中除了含有20個PKS，含有4個雜合PKS-NRPS，木霉菌種次級代謝產物與其他絲狀真菌一樣，大多數次級代謝合成基因簇在實驗室環境中是沉默的，限制了對其合成產物及功能的研究。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的上述不足，提供木霉菌Azaphilones類次級代謝產物的應用。

本發明的目的可通過以下技術方案實現：

一種重組表達質粒，其特征在于將以hph為篩選標記，Pcdna1為強啟動子過量表達tgaza5的重組表達質粒。

所述的重組表達質粒，優選通過以下方法構建得到：