[發明專利]冠突散囊菌孢子多糖組分的制備方法

有效

• 申請號: 202010801727.5
• 申請日: 2020-08-11
• 公開（公告）號: CN111961142B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 范代娣;古娟;段志廣;馬曉軒
• 申請（專利權）人: 陜西巨子生物技術有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00;A61P1/16
• 代理公司: 北京唐頌永信知識產權代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

本發明提供一種冠突散囊菌孢子多糖組分的制備方法，其包括下述步驟：將冠突散囊菌孢子破壁后進行干燥，研磨成粉末，按每1g菌絲加30?50mL的水并混勻，于80℃?100℃水提1?4小時，然后抽濾取上清；對于所得的上清，加5?10倍體積的95％的乙醇醇沉24?48小時，于4?8℃過濾沉淀后，在3000r/min條件下離心10min，棄上清液，取沉淀，得到冠突粗多糖；對于所得的冠突粗多糖，按每100mg冠突粗多糖加蒸餾水3?5mL溶解，10000?12000rpm離心10min，將上清液上樣于C18色譜柱進行分離純化，按保留時間由短至長依次收集冠突孢子多糖?1、2、3、4。

技術領域

本發明涉及生物工藝學，具體涉及一種冠突散囊菌孢子多糖組分的制備方法，該冠突散囊菌孢子多糖組分可用于制備預防和/或治療肝癌的藥物。

背景技術

有研究報道，冠突散囊菌分泌多糖是一種很好的免疫調節劑，能夠有效地激活免疫細胞，調節機體的免疫功能，同時也發現多糖具有抗腫瘤活性，以及降血脂、抗氧化的功效。冠突散囊菌子囊孢子有一層較厚的孢子壁，其質地堅韌、不易分解，對孢子在干燥環境下的休眠具有積極意義，但另一方面也阻礙了人體對其中物質的有效利用。探尋一種高效、對活性成分影響小的冠突散囊菌孢子活性成分提取方法，是研究冠突散囊菌子囊孢子的各種活性成分的功能并加以利用的重要前提。

發明內容

發明人經過深入研究，開發了一種冠突散囊菌孢子多糖活性組分的制備方法，并發現通過該方法制備得到的冠突散囊菌孢子多糖組分(冠突孢子多糖-4)具有下述功能：

a.體外實驗表明，冠突孢子多糖-4明顯抑制高轉移人肝癌細胞株HepG2的增殖，有時間依賴關系。

b.體外實驗表明，冠突孢子多糖-4對WB-F344細胞體外惡性轉化有抑制作用。

c.體外實驗表明，冠突孢子多糖-4對TPA誘導WB-F344細胞間隙連接通訊(GJIC)抑制效應有阻斷作用。

d.體外實驗表明，冠突孢子多糖-4可明顯降低轉化細胞的惡性程度。

e.體內實驗表明，冠突孢子多糖-4具有保護大鼠肝臟，以免其受到化學誘變劑的損傷的功效。

因此，本發明包括：

1.一種冠突散囊菌孢子多糖組分的制備方法，其包括下述步驟：

步驟A：將冠突散囊菌孢子破壁后進行干燥，研磨成粉末，按每1g菌絲加30-50mL的水并混勻，于80℃-100℃水提1-4小時，然后抽濾取上清；

步驟B：對于步驟A所得的上清，加5-10倍(優選8倍)體積的95％的乙醇醇沉24-48小時，于4-8℃過濾沉淀后，在3000rpm條件下離心10min，棄上清液，取沉淀，得到冠突粗多糖；

步驟C：對于步驟B所得的冠突粗多糖，按每100mg冠突粗多糖加蒸餾水3-5mL溶解，10000-12000rpm離心10min，將上清液上樣于C18色譜柱進行分離純化，按保留時間由短至長依次收集冠突孢子多糖-1，冠突孢子多糖-2，冠突孢子多糖-3和冠突孢子多糖-4，其中冠突孢子多糖-4即為所制備的冠突散囊菌孢子多糖組分。

2.根據項1所述的制備方法，其中，所述步驟C中的C18色譜柱為ZORBXA EclipseXDB-C₁₈(250mm×4.6mm，5μm，安捷倫公司產品)。

3.根據項1或2所述的制備方法，其中，所述步驟C中的所述C18色譜柱進行分離純化的條件為流速：1.0mL/min，進樣體積：20μL，柱溫：25℃。

4.根據項1～3中任一項所述的制備方法，其中，所述步驟C中收集的冠突孢子多糖-1的保留時間為3.712分鐘，冠突孢子多糖-2的保留時間為4.887分鐘，冠突孢子多糖-3的保留時間為7.352分鐘，冠突孢子多糖-4的保留時間為12.178分鐘。