[發(fā)明專利]一種牙髓干細(xì)胞的培養(yǎng)及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010800588.4
• 申請日: 2020-08-11
• 公開（公告）號: CN111849889A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王凱
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌諾匯醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/077
• 代理公司: 南昌卓爾精誠專利代理事務(wù)所(普通合伙) 36133
• 代理人: 徐柳華

1.一種牙髓干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，

培養(yǎng)過程中使用了鬼針草苷I，所述鬼針草苷I結(jié)構(gòu)如下：

2.權(quán)利要求1所述的牙髓干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其特征在于,培養(yǎng)步驟如下：

(1)獲得原代牙髓干細(xì)胞并進(jìn)行傳代培養(yǎng)；

(2)配制鬼針草苷I成骨誘導(dǎo)條件培養(yǎng)基：

含10％AB血清的α-MEM培養(yǎng)液，加入β-甘油磷酸鈉、抗壞血酸、地塞米松、鬼針草苷I至終濃度分別為10mmol/L、0.05mmol/L、100mmol/L以及0.1-0.2mmol/L；

(3)誘導(dǎo)培養(yǎng)：

第3代DPSCs消化后制備細(xì)胞懸液，將細(xì)胞接種于步驟(2)獲得的成骨誘導(dǎo)條件培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。

3.權(quán)利要求2所述的牙髓干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(1)為：

取牙髓組織，置于無血清培養(yǎng)基中，將牙髓組織剪成組織塊；得到的組織塊置于人牙髓干細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，覆蓋蓋玻片；在培養(yǎng)第4～12d時，根據(jù)細(xì)胞生長密度，半量更換培養(yǎng)基；培養(yǎng)第15～18d時，細(xì)胞匯合率達(dá)到70～80％，進(jìn)行傳代培養(yǎng)，得到牙髓干細(xì)胞；

所述人牙髓干細(xì)胞培養(yǎng)基以α-MEM培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，包含體積百分含量為5％～10％的人AB血清、100μM抗壞血酸、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素鈉和100mg/ml鏈霉素。

4.權(quán)利要求3所述的牙髓干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(2)鬼針草苷I終濃度為0.2mmol/L。

5.權(quán)利要求4所述的牙髓干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(3)誘導(dǎo)培養(yǎng)：

第3代DPSCs消化后制備細(xì)胞懸液，將細(xì)胞接種于成骨誘導(dǎo)條件培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)：以2×10⁴個/孔的密度接種至24孔板，37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞融合至80％左右時，將各組樣本孔內(nèi)的培養(yǎng)液換為鬼針草苷I成骨誘導(dǎo)條件培養(yǎng)基。