[發(fā)明專利]一種預防和治療創(chuàng)傷弧菌感染的卵黃抗體制備方法

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• 申請日: 2020-08-10
• 公開（公告）號: CN112175077A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設計）人: 祁少海;蔡瑞昭;舒斌
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/02;A61K39/40;A61P31/04
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

1.一種預防和治療創(chuàng)傷弧菌感染的卵黃抗體，其特征在于，所述卵黃抗體通過以下方法制備而成：

(1)從創(chuàng)傷弧菌感染患者的樣本中分離創(chuàng)傷弧菌；

(2)制備創(chuàng)傷弧菌滅活菌體抗原并對產蛋母雞進行免疫；

(3)收集免疫后的雞蛋，從雞蛋的卵黃中提取純化卵黃抗體。

2.如權利要求1所述的卵黃抗體，其特征在于，所述步驟(1)從創(chuàng)傷弧菌感染患者的樣本中分離創(chuàng)傷弧菌的具體步驟包括：創(chuàng)傷弧菌菌株的提取鑒定、分離純化及培養(yǎng)保存。

3.如權利要求2所述的卵黃抗體，其特征在于，所述創(chuàng)傷弧菌菌株的提取鑒定、分離純化及培養(yǎng)保存的具體操作如下：選取臨床上創(chuàng)傷弧菌感染的患者的創(chuàng)面水泡液或組織滲液，將其稀釋后進行涂板，培養(yǎng)過夜；挑取單一菌落離心純化后，用質譜分析儀明確是否為創(chuàng)傷弧菌感染，將確定為創(chuàng)傷弧菌的菌株進行擴增培養(yǎng)。

4.如權利要求1所述的卵黃抗體，其特征在于，所述步驟(2)中制備創(chuàng)傷弧菌滅活菌體抗原具體步驟如下：使用甲醛滅活法對創(chuàng)傷弧菌進行滅活，制備全滅活菌體抗原。

5.如權利要求1所述的卵黃抗體，其特征在于，所述步驟(2)中對產蛋母雞進行免疫的具體步驟如下：取抗原液在母雞的翅基部三角肌或胸肌部位行肌肉或皮下注射，每兩周接種一次。

6.如權利要求1所述的卵黃抗體，其特征在于，所述步驟(2)中還包括對產蛋母雞進行免疫后產生的卵黃抗體的滴度檢測。

7.如權利要求1所述的卵黃抗體，其特征在于，所述步驟(3)中從雞蛋的卵黃中提取純化卵黃抗體的具體操作如下：

(1)將蛋黃水混合溶解成勻漿，調節(jié)均漿pH值5.0±0.5，將酸化的勻漿溶液降溫至2-8℃的條件下靜置1-12小時；

(2)保持2-8℃環(huán)境下對均漿以轉速5000-15000r/min高速離心，保留上清液；

(3)在上清液中加入硫酸銨，待鹽析完全，經離心后收集沉淀，獲得粗提物；

(4)將上述粗提物復溶于弱酸性緩沖液中，再將復溶液依次通過300kD、100kD的超濾膜進行濃縮，獲得卵黃抗體混合濃縮液。

8.如權利要求7所述的卵黃抗體，其特征在于，所述硫酸銨的質量濃度為15％-45％。

9.如權利要求1所述的卵黃抗體，其特征在于，所述步驟(3)中從雞蛋的卵黃中提取純化卵黃抗體的步驟還包括檢測卵黃抗體的效價及添加蛋白穩(wěn)定劑。

10.如權利要求1～9任一項所述的創(chuàng)傷弧菌滅活菌體的卵黃抗體在制備預防或/和治療創(chuàng)傷弧菌感染的試劑或藥物中的用途。