[發(fā)明專利]抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒、制備方法及檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010797714.5
• 申請(qǐng)日: 2020-08-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111999509A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖宇強(qiáng);張平;馬金玉;周玲;賴鵬飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市宇諾生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543
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1.一種抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒，其特征在于，包括反應(yīng)物質(zhì)，所述反應(yīng)物質(zhì)包括檢測(cè)線熒光偶合物及質(zhì)控線熒光偶合物，所述檢測(cè)線熒光偶合物含有熒光微球標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體，所述質(zhì)控線熒光偶合物含有熒光微球標(biāo)記的雞IgY抗體、兔IgG抗體或鼠IgG抗體中的一種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)物質(zhì)由檢測(cè)線熒光偶合物及質(zhì)控線熒光偶合物在凍干保護(hù)液的保護(hù)下經(jīng)過(guò)冷凍干燥制成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述熒光微球?yàn)闀r(shí)間分辨熒光微球，所述時(shí)間分辨熒光微球包埋稀土離子，同時(shí)所述時(shí)間分辨熒光微球表面修飾有氨基、羧基或羥基中至少一種功能基團(tuán)；所述稀土離子選自鑭系元素中Sm釤、Eu銪、Gd釓、Tb鋱、Dy鏑中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述凍干保護(hù)液含有保護(hù)蛋白、糖類的緩沖液；所述緩沖液選自磷酸鹽、硼酸鹽或Tris緩沖液中的至少一種，濃度為10mM-50mM；所述的保護(hù)蛋白選自牛血清白蛋白，卵清蛋白或酪蛋白中的至少一種，濃度為0.1％-3％；所述糖類選自海藻糖、蔗糖、乳糖中的至少一種，濃度為0.1％-10％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括試劑卡，所述試劑卡包括殼體及試紙條，所述試紙條包括樣品墊、硝酸纖維素膜、吸水墊及背襯板，所述硝酸纖維素膜貼在所述背襯板上，所述樣品墊和所述吸水墊的一端分別搭接于所述硝酸纖維素膜的兩端，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有檢測(cè)線與質(zhì)控線，所述檢測(cè)線與質(zhì)控線相互平行，且質(zhì)控線位于硝酸纖維素膜上靠近吸水墊的一端，所述檢測(cè)線包被有抗繆勒氏管激素單克隆抗體，所述質(zhì)控線包被有羊抗雞IgY抗體、羊抗兔IgG抗體或羊抗鼠IgG抗體中的一種，所述殼體包括能相互扣合的上蓋和下蓋，所述上蓋對(duì)應(yīng)所述硝酸纖維素膜的位置設(shè)有顯示窗，對(duì)應(yīng)所述樣品墊的位置設(shè)有加樣孔。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括反應(yīng)緩沖液，所述反應(yīng)緩沖液包括表面活性劑、糖類、防腐劑、氯化鈉及緩沖液；

所述表面活性劑選自曲拉通x-100、吐溫20、S16、S9中的至少一種，濃度為0.1％-1％；所述糖類選自海藻糖、蔗糖、乳糖中的至少一種，濃度為0.1％-10％；所述NaCl的濃度為0.8-2％；所述防腐劑選自山梨酸、苯甲酸或proclin300中的至少一種，濃度為0.01％-0.1％；所述緩沖液選自磷酸鹽、硼酸鹽或Tris緩沖液中的至少一種或幾種，濃度為10mM-50mM。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)物質(zhì)的制備方法，包括如下步驟：

1)活化熒光微球；

2)熒光微球與交聯(lián)劑交聯(lián)；

3)熒光微球與抗繆勒氏管激素單克隆抗體反應(yīng)，得到檢測(cè)線熒光偶合物；

4)熒光微球與雞IgY抗體、兔IgG抗體或鼠IgG抗體中的一種反應(yīng)，得到質(zhì)控線熒光偶合物；

5)用凍干保護(hù)液分別將檢測(cè)線熒光偶合物與質(zhì)控線熒光偶合物稀釋，配制成反應(yīng)物質(zhì)溶液；

6)將反應(yīng)物質(zhì)溶液分裝在塑料試管中，冷凍干燥，得反應(yīng)物質(zhì)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述步驟2)中交聯(lián)劑包括EDC和Sulfo-NHS，EDC終濃度為0.04％-0.2％，Sulfo-NHS終濃度為0.12％-0.6％。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗繆勒氏管激素測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述步驟5)中凍干保護(hù)液將檢測(cè)線熒光偶合物稀釋100至1000倍，凍干保護(hù)液將質(zhì)控線熒光偶合物稀釋500至2000倍。

10.一種用于檢測(cè)抗繆勒氏管激素的定量檢測(cè)方法，其特征在于，采用權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的試劑盒，包括以下步驟：

步驟A：將冷藏保存的反應(yīng)物質(zhì)和反應(yīng)緩沖液在室溫放置，使其充分平衡；

步驟B：吸取反應(yīng)緩沖液放入反應(yīng)物質(zhì)試管，并立即吸取全血、血清或血漿加入裝有反應(yīng)緩沖液的反應(yīng)物質(zhì)試管中,得樣本混合液；

步驟C：蓋上反應(yīng)物質(zhì)試管蓋子，搖晃使樣本混合液充分混勻；

步驟D：吸取樣本混合液，加到試劑卡的加樣孔中，反應(yīng)；

步驟E：將反應(yīng)后的試劑卡插入熒光免疫分析儀中，進(jìn)行結(jié)果讀取。