[發明專利]一種粘蛋白1及其唾液酸糖基的雙重熒光成像方法及應用

有效

• 申請號: 202010795818.2
• 申請日: 2020-08-10
• 公開（公告）號: CN111999504B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 尹健;王曉麗;胡靜;葉雨霏
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N33/58;G01N33/53;G01N21/64
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.用于粘蛋白1及其唾液酸糖基雙重熒光成像的納米探針組合物，其特征在于，包括唾液酸-金納米星探針和粘蛋白1-量子點探針；

所述唾液酸-金納米星探針是在金納米星表面通過二硫鍵固定第一DNA以及聚乙二醇，再將短互補單鏈的第二DNA與唾液酸適配體堿基互補配對，再與巰基修飾的PEG偶聯制得；所述第一DNA通過堿基互補配對連有近紅外染料Cy5標記的唾液酸適配體；所述唾液酸適配體可特異性識別粘蛋白1上的唾液酸；所述第一DNA和第二DNA是與Sia 適配體互補的單鏈核酸；所述第一DNA的核苷酸序列為如SEQ ID NO.1所示；所述第二DNA的核苷酸序列如SEQID NO.2所示；所述Sia適配體具有如下結構：5’-Cy5-GACGCUGGGCCUAGUCCGUGACUAUAUCGAUUGCCUUUUCAGACUUGCGUC-3’；

所述粘蛋白1-量子點探針是由量子點依次與MUC1適配體、NH₂-PEG偶聯合成，使量子點表面通過酰胺鍵固定有可與MUC1蛋白骨架發生特異性識別的MUC1適配體和聚乙二醇；所述MUC1適配體具有如下結構：5’-NH₂-C₆-GCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGG-3’。

2.根據權利要求1所述的納米探針組合物，其特征在于，所述唾液酸-金納米星探針按如下方法制備：

（1）采用晶種生長法合成金納米星GNSs；

（2）將步驟（1）合成的GNSs和巰基修飾的第一DNA偶聯形成GNS-2；

（3）將步驟（2）制備的GNS-2與Cy5標記的Sia適配體通過堿基互補配對原則生成GNS-3；

（4）將步驟（3）制備的GNS-3與第二DNA偶聯形成GNS-4；

（5）將步驟（4）制備的GNS-4與巰基修飾的PEG偶聯得到唾液酸-金納米星探針。

3.根據權利要求1所述的納米探針組合物，其特征在于，所述粘蛋白1-量子點探針按如下方法制備：

（1）將CdSe@ZnS QDs和氨基修飾的MUC1適配體在EDC和NHS存在下進行偶聯形成QD-2；

（2）將步驟（1）制備的QD-2與氨基修飾的PEG在含EDC和NHS的環境中偶聯，得到量子點探針MUC1-QDs探針。

4.含有權利要求1~3任一所述納米探針組合物的腫瘤篩查試劑盒。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述腫瘤選自：肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、腸癌、鼻咽癌、乳腺癌、淋巴癌、腎癌、胰腺癌、膀胱癌、卵巢癌、子宮癌、骨癌、膽囊癌、唇癌、黑色素瘤、舌癌、喉癌、白血病、前列腺癌、腦癌、鱗癌、皮膚癌、血管瘤、脂肪瘤、甲狀腺癌肺癌、神經膠質瘤、宮頸癌。

6.權利要求1或2所述的納米探針組合物在制備檢測MUC1及其Sia糖基的產品中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述產品包括檢測試劑盒。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述檢測試劑盒用于體外檢測。

9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述檢測試劑盒用于體內檢測。

10.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述檢測試劑盒用于臨床組織樣本檢測。

11.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述檢測是將待測的腫瘤組織切片在含有所述納米探針組合物的環境中共孵育，然后用NIR照射2min，照射條件為980 nm，5 mW/cm²，再用激光共聚焦對QDs和FRET誘導的Cy5進行熒光成像，以分別反映MUC1蛋白骨架及其唾液酸的水平。