[發明專利]一種轉基因表達載體及其應用

在審

• 申請號: 202010795515.0
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN111893135A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 李朝煒;魏景芳;朱昀;劉穎
• 申請（專利權）人: 河北科技大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/29;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 杭州睿行專利代理事務所(普通合伙) 33326
• 代理人: 靳苗靜

1.一種轉基因表達載體，所述表達載體為重組表達載體，所述重組表達載體上連接有抗逆性基因，所述抗逆性基因包括LEA8981基因和抗除草劑基因bar，所述LEA8981基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述抗除草劑基因bar的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.根據權利要求1所述的轉基因表達載體，其特征在于，所述重組表達載體為pCAMBIA3301重組表達載體，所述重組表達載體上還連接有Ubiquitin啟動子，所述Ubiquitin啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

3.根據權利要求1或2所述的轉基因表達載體在制備轉基因植物中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述轉基因植物為抗逆性植物。

5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述LEA8981基因插入轉基因植物的10號染色體中，位于Os10g0351414和Os10g0351457兩個基因之間。

6.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述抗逆性植物為單子葉植物；優選地，所述單子葉植物為水稻。

7.一種轉基因植物的制備方法，包括將含有抗逆基因的重組表達載體導入植物細胞，得到抗逆性植物；所述抗逆性基因包括LEA8981基因和抗除草劑基因bar，所述LEA8981基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述抗除草劑基因bar的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述轉基因植物具體通過包括以下步驟的方法制得：

1）設計引物擴增Ubiquitin啟動子和LEA8981基因，然后將所述Ubiquitin啟動子和LEA8981基因酶切后，分別連接至pGEM-T載體中，得到Ubi-T載體和8981-T載體；

2）然后再酶切Ubi-T載體和LEA8981-T載體，分別得到Ubiquitin啟動子和LEA8981基因；

3）再將步驟2）中得到的所述Ubiquitin啟動子和LEA8981基因依次插入到pCAMBIA3301載體的多克隆位點中，得到pCAMBIA3301重組表達載體；

4）然后將所述pCAMBIA3301重組表達載體導入農桿菌中，得到重組農桿菌，再將其導入植物細胞，得到抗逆性植物。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述Ubiquitin啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

10.根據權利要求7至9中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述轉基因植物抗逆性植物；優選地，所示抗逆性植物為單子葉植物；更為優選地，所述單子葉植物為水稻。