[發明專利]一種提取分離純化神秘果素的方法

在審

• 申請號: 202010791857.5
• 申請日: 2020-08-08
• 公開（公告）號: CN111887341A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 涂行浩;張秀梅;杜麗清;陳妹;鄧旭;陳海芳;張明;馬智玲
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院南亞熱帶作物研究所
• 主分類號: A23J1/00
• 分類號: A23J1/00;A23J3/14;C07K14/415;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 李慧

1.一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)原料預處理：將采摘的新鮮神秘果除去葉梗，用無菌水清洗干凈，冷風機處理瀝干水分，放入冰箱凍藏或者液氮速凍；

(2)粗糖蛋白提取：神秘果果肉及果汁的制備：將凍藏的神秘果果實超聲解凍，分離果肉，加入純水使用均質機高速剪切均質，高速離心棄上清液，取沉淀物加入緩沖液二次均質，并在一定溫度條件下提取一段時間，然后將上清液膜過濾，截留得到澄清的含有神秘果素糖蛋白粗提液；

(3)提取純化：取磁性納米顆粒分散到緩沖液中直至平衡，然后按一定比例添加到濃縮后的神秘果素粗提溶液中，溫和混合后在室溫下孵育一定時間，然后用磁分離器分離吸附了神秘果素的磁性顆粒；

(4)磁珠解離：吸附了神秘果素的磁性顆粒，使用酸性緩沖溶液使其洗脫解離，將試管置于磁分離器上，等待30s，即可從上清液中解離回收磁性納米顆粒，將上清液轉移至新管中，即為純化后的神秘果素溶液；

(5)冷凍干燥：將純化后的神秘果素溶液，通過一定分子量的超濾膜，取截留液，冷凍干燥，得到神秘果素粉末。

2.根據權利要求1所述的一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：步驟(1)所述的神秘果采摘至預處理之間的時間間隔不超4小時，凍藏溫度-20～-40℃。

3.根據權利要求1所述的一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：步驟(2)所述的緩沖溶液為NaCl溶液、Tris-HCl緩沖液、PBS緩沖液或磷酸鹽緩沖液的一種或多種，pH值范圍為6.5～7.5。

4.根據權利要求1所述的一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：步驟(2)所述的一定溫度為15～25℃，一段時間為15～30min。

5.根據權利要求1所述的一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：步驟(2)所述的純水的加入量為果肉的10～20倍。

6.根據權利要求1所述的一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：步驟(2)所述的緩沖液的加入量為沉淀物的10～20倍。

7.根據權利求1所述的一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：步驟(3)所述的磁性納米顆粒為含有炔基、硼酸基或具有類似功能基團的納米磁珠；所述的緩沖溶液為Tris-HCl緩沖液，緩沖液與神秘果素粗提液的比例為1g：(50～150)mL，pH值范圍為6.8～7.2。

8.根據權利求1所述的一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：步驟(3)所述的孵育一定時間為30～60min。

9.根據權利求1所述的一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：步驟(4)所述的磁珠解離的酸性緩沖溶液的pH值為4.0～5.0。

10.根據權利求1所述的一種提取分離純化神秘果素的方法，其特征在于：步驟(5)所述的一定分子量的超濾膜為10～15kDa。