[發明專利]基于高通量測序技術檢測玉米葉部病原真菌的方法及應用

在審

• 申請號: 202010791245.6
• 申請日: 2020-08-07
• 公開（公告）號: CN111808936A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 劉文德;田雪亮;李智強
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/6895;C12Q1/04
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 趙徐平

1.基于高通量測序技術檢測玉米葉部病原真菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)取玉米植株葉片，富集葉部微生物，提取微生物總DNA；

(2)以步驟(1)提取的微生物總DNA為模板，PCR擴增真菌ITS序列，然后采用Illumina的PE300平臺進行高通量測序；

(3)將高通量測序結果根據97％閾值劃分操作分類單元OTU，進行物種鑒定，統計玉米葉部病原真菌的種類和序列數量；

(4)以每一屬病原真菌序列在總序列中的比例作為屬水平上的豐度，將豐度大于0.5％的列為高豐度病原真菌，小于0.5％的列為低豐度病原真菌；

(5)病原真菌豐度與病害病情指數呈正相關，根據病原真菌豐度預測后期病害發生種類和程度。

2.根據權利要求1所述的基于高通量測序技術檢測玉米葉部病原真菌的方法，其特征在于，

步驟(1)中于大喇叭口期取玉米植株葉片。

3.根據權利要求1所述的基于高通量測序技術檢測玉米葉部病原真菌的方法，其特征在于，

步驟(1)中富集葉部微生物具體為：

使用洗脫溶液對玉米植株葉片表面微生物進行超聲洗脫，獲得洗脫液；

對洗脫液進行抽濾富集，使用洗脫溶液洗滌、離心，獲得沉淀，用于微生物總DNA的提取。

4.根據權利要求3所述的基于高通量測序技術檢測玉米葉部病原真菌的方法，其特征在于，

所述洗脫溶液為添加有吐溫20的磷酸鹽緩沖液，吐溫20質量分數為2％。

5.根據權利要求1所述的基于高通量測序技術檢測玉米葉部病原真菌的方法，其特征在于，

步驟(1)中提取獲得的微生物總DNA濃度大于10ng/μL，總量大于1μg，OD260/280＝1.8-2.0，且DNA無降解、無污染。

6.權利要求1-5任意一項所述的基于高通量測序技術檢測玉米葉部病原真菌的方法在玉米葉部病害防治中的應用。

7.權利要求1-5任意一項所述的基于高通量測序技術檢測玉米葉部病原真菌的方法在抗病玉米選育中的應用。