[發明專利]檸檬酸光學探針及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010788138.8
• 申請日: 2020-08-07
• 公開（公告）號: CN114057891A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 楊弋;趙玉政;李寫;張秀澤;張則一
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;G01N21/64
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶啟長

1.一種融合蛋白，包括檸檬酸敏感多肽B和光學活性多肽A，其中光學活性多肽A位于兩個或多個檸檬酸敏感多肽B或者C之間，形成B1-L1-A-L2-B2式的融合蛋白結構，其中，L1和L2是接頭，B1和B2分別獨立選自(1)CitA或與其具有至少90％序列相同性并且保留檸檬酸敏感功能的變體和(2)CcpE或與其具有至少90％序列相同性并且保留檸檬酸敏感功能的變體，

優選地，CitA具有SEQ ID NO:1所示的序列，CcpE具有SEQ ID NO:2所示的序列，

優選地，光學活性多肽A選自以下的任意一種或多種：具有SEQ ID NO:3的cpYFP、具有SEQ ID NO:4的cpGFP、具有SEQ ID NO:5的cpBFP、具有SEQ ID NO:6的cpmApple，和與它們任一具有至少90％序列相同性并且保留熒光顯色功能的變體，

優選地，L1和L2分別獨立選自無、P、H、N、S、Q、A、D、Y、M、T、E、C、L、V、W、I、F、K、R、G、GS、GGS、GGGS、GSGGS、GGSGGS、GGGSGGS、RSE、GGS、PAP、PDA、RVR、RED、PER、RNA、PDP、RGA、RPP、TWD、TLE，

優選地，B1和B2相同。

2.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，

B1和B2是CitA，A選自cpYFP、cpGFP、cpBFP、cpmApple，L1和L2選自無、G、GS、GGS、RSE、PAP、PDA、RVR、RED、PER、RNA、PDP、RGA、RPP、TWD、TLE；優選地，A是cpYFP，L1選自無、G、GS、GGS、TWD、TLE，L2選自無、G、GS、GGS、RSE、GGS、PAP、PDA、RVR、RED、PER、RNA、PDP、RGA、RPP，或

B1和B2是CcpE，A選自cpYFP、cpGFP、cpBFP、cpmApple，L1和L2選自無、G、P、H、N、S、Q、A、D、Y、M、T、E、C、L、V、W、I、F、K、R、GS、GGS、GGGS、GSGGS、GGSGGS、GGGSGGS；優選地，A是cpYFP，L1選自無、G、P、H、N、S、Q、A、D、Y、M、T、E、C、L、V、W、I、F、K、R、GS、GGS、GGGS、GSGGS、GGSGGS、GGGSGGS，L2選自無、G、GS、GGS、GGGS、GSGGS、GGSGGS、GGGSGGS。

3.如權利要求1所述的融合蛋白，其中B1、A或B2的變體是在B1、A或B2的N端和/或C端具有1-5個氨基酸的截短和/或突變的變體。

4.一種核酸分子，其包含

(1)權利要求1-3中任一項所述的多肽的編碼序列，

(2)與(1)具有至少70％序列相同性的序列，

(3)(1)或(2)的互補序列或片段，優選所述片段長5-50bp。

5.一種核酸構建物，包含權利要求4所述的核酸分子，優選地，所述核酸構建物是克隆載體、表達載體或重組載體。

6.一種宿主細胞，所述宿主細胞

(1)表達權利要求1-3中任一項所述的多肽；

(2)包含權利要求4所述的核酸分子；或

(3)包含權利要求5所述的核酸構建物。

7.一種檢測試劑盒，其包含選自以下的一項或任意多項：

(1)權利要求1-3中任一項所述的多肽；

(2)權利要求4所述的核酸分子；

(3)權利要求5所述的核酸構建物；

(4)權利要求6所述的宿主細胞；和

檢測檸檬酸所需的其他試劑。

8.權利要求1-3中任一項所述的融合蛋白、權利要求4所述的核酸分子、權利要求5所述的核酸構建物或權利要求6所述的宿主細胞在檢測檸檬酸中的用途。