[發明專利]一種高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法在審
| 申請號： | 202010785896.4 | 申請日： | 2020-08-04 |
| 公開（公告）號： | CN111929386A | 公開（公告）日： | 2020-11-13 |
| 發明（設計）人： | 楊玲;叢佩華;呂德國;秦嗣軍 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院果樹研究所 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 125100 遼寧省興城市*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高效 色譜 檢測 蘋果 果肉 細胞壁 單糖 方法 | ||
1.一種高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法，其特征在于：所述高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法具體包括如下步驟：
(1)首先對蘋果果肉細胞壁多糖進行提取：
酸水解：稱取蘋果果肉多糖AIR樣品各10mg，一組三個重復，共3組，放入玻璃管中，加入3ml 2mol/L的三氟乙酸，沖入氮氣封口，在恒溫水浴搖床中70～90℃震蕩65h～75h，然后取出，調節PH值；
(2)然后進入酶解步驟：
向溶液中加入25ul VL9逆轉錄酶，將溶液加熱至45℃～55℃，在震蕩機中震蕩20h～26h，經過震蕩后取出煮沸12min～20min；
(3)單糖衍生步驟：
取步驟(2)中得到的液體100ul，向液體中加入氫氧化鈉100ul，然后再加入200ul0.6mol/L的PMP，混合均勻，將混合液在65℃～75℃溫度下水浴90min～110min，取出避光放置8Min～12Min，然后加100ul鹽酸，混勻；再加氯仿萃取2～3次，取上清液過膜，放入樣品瓶中；
(4)將樣品瓶中的樣品送入高效液相色譜檢測步驟：
高效液相色譜的檢測條件為：采用流動相磷酸鹽緩沖液，ph為6.85，用乙腈梯度洗脫，將高效液相色譜儀的柱溫設置為30℃～40℃。
2.根據權利要求1所述的一種高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法，其特征在于：步驟(1)調節PH時，分別用1mol/L的NaOH溶液和0.1mol/L的NaOH溶液調節溶液的PH值為5.0。
3.根據權利要求1或2所述的一種高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法，其特征在于：步驟(1)中，在恒溫水浴搖床中80℃震蕩72h。
4.根據權利要求1或2所述的一種高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法，其特征在于：步驟(2)中，將溶液加熱至50℃，在震蕩機中震蕩24h。
5.根據權利要求1或2所述的一種高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法，其特征在于：步驟(2)中，經過震蕩后取出煮沸15min。
6.根據權利要求1或2所述的一種高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法，其特征在于：步驟(3)中，將混合液在70℃溫度下水浴100min，取出避光放置10Min。
7.根據權利要求1或2所述的一種高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法，其特征在于：步驟(3)中，加氯仿萃取3次。
8.根據權利要求1或2所述的一種高效液相色譜法檢測蘋果果肉細胞壁單糖的方法，其特征在于：步驟(4)中，將高效液相色譜儀的柱溫設置為35℃。
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