[發(fā)明專利]雜交瘤細胞株ACE8及其產(chǎn)生的APOE4點突變單克隆抗體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010785260.X
• 申請日: 2020-08-06
• 公開（公告）號: CN112538113B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發(fā)明（設計）人: 王小川;王喆;曾寬;吳剛
• 申請（專利權）人: 武漢天德生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/92
• 代理公司: 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 陳琳

本發(fā)明涉及檢測技術領域，特別涉及雜交瘤細胞株及基于雜交瘤細胞株的抗APOE4點突變單克隆抗體，該雜交瘤細胞株的保藏編號為CCTCC?NO：C2020121。所述抗體重鏈氨基酸序列如SEQ?ID?NO：3所示，所述抗體輕鏈氨基酸序列如SEQ?ID?NO：4所示，所述編碼抗體重鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，編碼輕鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。本發(fā)明所提供的單克隆抗體異性強、靈敏度高。

技術領域

本發(fā)明涉及一種單克隆抗體，具體涉及一種APOE4點突變單克隆抗體、分泌該單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

背景技術

阿爾茨海默病(Alzheimer's?disease,AD)，又名老年癡呆癥，是一種年齡相關的神經(jīng)退行性疾病，其主要臨床表現(xiàn)為記憶功能障礙和行為方面的改變。隨著人口老齡化的加劇，中國AD患者數(shù)目急劇增加，到2015年已達950萬，成為全球癡呆癥患者人數(shù)最多的地區(qū)，給社會和家庭帶來巨大的負擔。

作為一種進行性的疾病，AD最重要的生理特征是大腦部分區(qū)域經(jīng)歷進行性功能障礙、神經(jīng)元損失和突觸的喪失。Bateman等的研究證明，在AD發(fā)作前10至20年患者大腦就開始逐漸產(chǎn)生變化。而這些功能性的變化往往難以逆轉(zhuǎn)，這也導致了目前AD治療的困境。因此，對早期AD的檢測可能是預防與治療AD最有效的手段。

血液生物標記物的檢測因其便宜、易于操作以及非侵入性的優(yōu)勢成為眾多疾病檢測的首選方式。而在AD中，眾多蛋白被證明在AD患者血漿中有明顯變化，如BDNF,AGT,IGFBP-2,OPN等，提示血漿蛋白質(zhì)含量檢測可能是AD早期診斷有價值的方式。

而載脂蛋白E(ApoE)被證明與AD發(fā)生相關。載脂蛋白(Apo)E基因分為三種等位基因型ε2、ε3、ε4，分別編碼ApoE2、ApoE3和ApoE4三種異構體。三種不同亞型ApoE之間的區(qū)別僅在于其一級結構112與158位點的氨基酸不同，即ApoE2(112Cys,158Cys)、ApoE3(112Cys,158Arg)、ApoE4(112Arg,158Arg)。其中，ApoEε4基因高表達已被公認為是AD最大的危險因素之一。1990年Duke大學對占發(fā)病大部分的散發(fā)性AD(SAD)和遲發(fā)家族性AD(FAD)做免疫組化分析發(fā)現(xiàn):老年斑和神經(jīng)纖維纏結中存在ApoE4。研究證明,散發(fā)性和家族性晚發(fā)AD均與ε4有關。臨床發(fā)現(xiàn)雜合子ε4攜帶者患晚發(fā)AD的機率比非攜帶者高3倍、純合子ε4攜帶者患AD的機率比非攜帶者高10-20倍。carwfodr等發(fā)現(xiàn)ε4基因與患者年齡、發(fā)病年齡有相關性。而在早期診斷中，若個體攜帶ApoE4,則給AD的診斷增加至少5％～10％的置信度,尤其對于不同癡呆類型的鑒別診斷。同時若患者具備AD相關行為表型，且攜帶ApoE4,則診斷AD的準確性可達94％～98％。這些均提示：ApoE4基因型的檢測可能是早期AD診斷最有價值的指標之一。

但是，目前國內(nèi)外對ApoE基因型的檢測主要通過第二代高通量測序系統(tǒng)，成本高昂的同時，準確性亦難得到保證。據(jù)2015年底全國性腫瘤二代測序?qū)嶒炇屹|(zhì)量評估報告結果顯示，55％的實驗室測序結果不合格，22％的實驗室質(zhì)量評估為0分。這些導致ApoE4基因型檢測在AD診斷中難以被推廣使用。

而基因型的變化會導致蛋白表達的變化。據(jù)文獻報道,ApoE等位基因的差異可引起AD患者血清抑ApoE濃度發(fā)生變化,并使AD患者血脂代謝發(fā)生異常；AD患者血清ApoE4濃度較正常人顯著升高。提示檢測血清中ApoE4蛋白的含量可能在早期AD診斷中具有非常重要的意義。而目前國內(nèi)外并未有ApoE4蛋白檢測試劑盒面市。與此同時，蛋白質(zhì)試劑盒檢測具備準確度高、成本低廉的優(yōu)勢。因此，研究者認為血清ApoE4蛋白檢測試劑盒的研發(fā)能為早期AD診斷提供有力的證據(jù)，具備一定的現(xiàn)實意義及經(jīng)濟效益。單克隆抗體技術在疾病診斷、藥物開發(fā)中的應用是目前醫(yī)藥領域的一個研究熱點，也為多種疾病的治療提供了新的途徑。

綜上所述，開發(fā)一種快速、靈敏、特異性強的APOE4點突變單克隆抗體并應用于臨床診斷具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容