[發(fā)明專利]一種杜梨耐鹽基因、蛋白及重組載體和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010783793.4
• 申請日: 2020-08-06
• 公開（公告）號: CN111996197B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃小三;董慧珍;王春孟;喬清海;張紹鈴;陳啟明;馬明;陳紫齡;謝智華;吳巨友;齊開杰;陶書田
• 申請（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C12N15/11;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/20;A01H6/74
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

本發(fā)明公開了一種杜梨耐鹽基因、蛋白及重組載體和應(yīng)用，涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述耐鹽基因PbbHLH67的序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明將該基因構(gòu)建超表達載體和沉默載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化分別使其在擬南芥中穩(wěn)定遺傳和在杜梨中瞬時轉(zhuǎn)化表達，對獲得的陽性植株苗進行耐鹽功能驗證。結(jié)果顯示，PbbHLH67基因能夠有效的增加植株的耐鹽性。該基因的發(fā)現(xiàn)，為植物抗逆分子育種提供了新的基因資源，為我國乃至世界鹽堿地植物培育提供參考，有利于提高我國鹽堿地利用率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種杜梨耐鹽基因、蛋白及重 組載體和應(yīng)用。

背景技術(shù)

梨作為世界主栽果樹之一，在中國其種植面積和產(chǎn)量僅次于蘋果和柑 橘，出口量占世界第一，是我國重要的果樹經(jīng)濟作物。我國梨的栽培品種豐 富，主要涉及白梨、西洋梨、砂梨、秋子梨，多分布在中國華北、東北、西 北及長江流域地區(qū)，其中白梨、砂梨、秋子梨都原產(chǎn)于中國，我國是梨屬植 物中心發(fā)源地之一。因其擁有廣泛的栽培地域，導(dǎo)致梨在生長發(fā)育的過程中 經(jīng)常遭受環(huán)境因素的影響，如干旱、低溫和鹽堿等。因此，是否能培育出優(yōu)良的抗逆新品種便成為了梨產(chǎn)業(yè)發(fā)展最至關(guān)重要的因素。梨屬于薔薇科多年 生木本果樹，其生長周期長且具有自交不親和的特點，因此用傳統(tǒng)的育種方 法不能高效的獲得優(yōu)良品種。所以，如何快速獲得抗逆梨品種并快速應(yīng)用于 生產(chǎn)，成為當(dāng)前育種學(xué)家們的又一重要難題。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù) 的不斷發(fā)展，挖掘抗性基因從而快速培育梨抗逆新品種成為一種必不可少的 技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種杜梨耐鹽基因、蛋白及重組載體 和應(yīng)用，所述PbbHLH67基因具有增強植物抵御鹽害的功能，將PbbHLH67 在植物中超表達，能有效提高植物的抗鹽性。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種杜梨耐鹽基因PbbHLH67，所述耐鹽基因PbbHLH67 的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發(fā)明還提供了上述耐鹽基因PbbHLH67的編碼蛋白，所述編碼蛋白的 氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本發(fā)明還提供了一種擴增上述耐鹽基因PbbHLH67的引物對，所述引物 對包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所 示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本發(fā)明還提供了一種包括上述耐鹽基因PbbHLH67的重組載體，所述重 組載體以PCMBIA1300為基礎(chǔ)載體，所述耐鹽基因PbbHLH67位于所述基 礎(chǔ)載體的XbaI和BamHI多克隆位點之間。

本發(fā)明還提供了上述耐鹽基因PbbHLH67或上述引物對或上述重組載 體在調(diào)節(jié)植物耐鹽性中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，所述調(diào)節(jié)包括提高。

本發(fā)明還提供了上述耐鹽基因PbbHLH67或上述引物對或上述重組載 體在培育耐鹽植物株系中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，所述植物包括擬南芥或杜梨。

本發(fā)明提供了一種杜梨耐鹽基因PbbHLH67，將杜梨實生苗置于鹽脅迫 環(huán)境中，隨著鹽脅迫時間的延長，所述耐鹽基因PbbHLH67的表達量相應(yīng)升 高，表明所述耐鹽基因PbbHLH67響應(yīng)鹽脅迫處理，具有調(diào)控抗鹽功能。