[發明專利]一種編碼人受體酪氨酸激酶Mer的核苷酸序列及其應用

有效

• 申請號: 202010781480.5
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN111826378B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 李斌;任盛
• 申請（專利權）人: 武漢紐福斯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N9/12;C12N15/864;A61K48/00;A61P27/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 劉猛

本發明涉及生物醫藥基因治療技術領域，公開了一種編碼人受體酪氨酸激酶Mer的核苷酸序列及其應用。本發明所述核苷酸序列與SEQ ID NO:3所示核苷酸序列有≥95％相同性。本發明證實使用AAV?MERTK藥物處理可以顯著改善MERTK突變導致視網膜色素變性的大鼠的視網膜病理癥狀，以及視網膜功能的恢復。玻璃體腔注射AAV?MERTK藥物，MERTK可以在視網膜色素上皮層高效表達，并且增加視網膜外核層厚度。同時，視網膜電位圖顯示，和對照組相比，AAV?MERTK藥物處理組大鼠對刺激反應強烈。因此此AAV?MERTK藥物具有預防或治療視網膜色素變性的作用。

技術領域

本發明涉及生物醫藥基因治療技術領域，更具體的說是涉及一種編碼人受體酪氨酸激酶Mer的核苷酸序列及其應用。

背景技術

MERTK編碼受體酪氨酸激酶Mer，受體酪氨酸激酶通常情況下通過與幾種配體(包括LGALS3、TUB、TULP1或GAS6)結合，將細胞外基質的信號轉導到細胞質中。通過以上方式，受體酪氨酸激酶能夠調節許多生理過程，包括細胞存活、遷移、分化和凋亡細胞的吞噬(效應細胞)。而在視網膜色素上皮細胞中，MERTK的功能是介導其吞噬視細胞外節段脫落碎片，維持視錐視桿細胞正常代謝更新。

MERTK突變會引起視網膜色素變性38(RP38)，由于MERTK突變導致蛋白失去功能，RPE細胞無法正常吞噬視細胞外節段碎片，內區段與外區段之間存在大量碎片堆積；同時視網膜血管會出現密度與結構異常，具體表現為脫細胞毛細血管的數量增多，Müller細胞纖維通過視網膜延伸到視網膜下間隙。患者在眼底檢查時可見視網膜色素沉積，初期表現為視桿細胞丟失，隨后是視錐細胞丟失。患者通常有夜視盲和中周邊視野喪失。隨著病情的發展，遠周邊視野喪失，最終中央視力丟失。

天然存在的AAV血清型通常無法在玻璃體腔一側轉導視網膜組織細胞，因為存在內限膜、神經膠質細胞等阻止AAV病毒粒子擴散的屏障。通過構建AAV2衣殼蛋白編碼序列文庫，在loop4的位置插入隨機7氨基酸序列，將突變的血清型注入小鼠玻璃體腔進行篩選，富集到一種主要的突變亞型，稱為AAV2/2-7M8，即AAV2～588LALGETTRP。AAV2/2-7M8血清型具有很強的視網膜組織趨性，該血清型包裝的熒光報告蛋白通過玻璃體腔注射小鼠眼部，能夠在整個視網膜中檢測到熒光。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種編碼人受體酪氨酸激酶Mer的核苷酸序列，使得所述核苷酸序列經過密碼子使用偏好、DNA重復序列、mRNA二級結構、GC含量等多個參數的優化，可以使MERTK表達效率更高；

本發明的另外一個目的在于提供承載上述核苷酸序列的病毒載體，并具備預防或治療MERTK突變導致視網膜色素變性的作用；

本發明的另外一個目的在于提供包含上述病毒載體或核苷酸序列的藥物制劑，并具備預防或治療MERTK突變導致視網膜色素變性的作用；；

本發明的另外一個目的在于提供上述核苷酸序列、病毒載體以及藥物制劑在預防或治療MERTK突變導致視網膜色素變性領域的中相關應用，包括但不限于相關藥品、試劑的制備以及預防或治療方法中的應用；

本發明的另外一個目的在于提供上述藥物制劑的遞送方法，將所述藥物制劑注射至眼部如視網膜下或玻璃體腔注射。

為實現上述發明目的，本發明提供如下技術方案：

一種編碼人受體酪氨酸激酶Mer的核苷酸序列，其與SEQ ID NO:3所示核苷酸序列有≥95％相同性。

作為優選，其與SEQ ID NO:3所示核苷酸序列有≥98％相同性；進一步優選地，其與SEQ ID NO:3所示核苷酸序列有≥99％相同性；在本發明具體實施方式中，其序列如SEQID NO:3所示。

作為優選，所述核苷酸序列為cDNA序列。