[發明專利]一種恢復替加環素抗菌活性的方法

在審

• 申請號: 202010780944.0
• 申請日: 2020-08-06
• 公開（公告）號: CN113582870A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 胡付品;楊洋;董棟;鄭永貴;吳湜;郭燕;朱德妹
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: C07C231/22
• 分類號: C07C231/22;C07C237/26
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發明屬于生物、醫藥技術領域，涉及重要抗菌藥物的藥敏試驗，具體涉及替加環素的藥敏試驗，尤其是針對替加環素藥敏試驗中，恢復抗菌活性的方法。本發明中針對替加環素藥敏試驗的影響因素，采用乙二胺四乙酸EDTA溶液，保持替加環素在不同環境下的穩定性，不易被降解；本發明進一步提供了EDTA在制備替加環素的穩定劑復敏液中的用途；本發明不需要額外的其他試劑，僅在常規操作基礎上，在替加環素紙片上滴加適當體積的復敏液即可完成操作，解決目前替加環素藥敏試驗的重大問題，有助于獲得真實可靠的體外替加環素藥敏結果，本發明方法具有操作簡便、結果準確且重復性好等優點。

技術領域

本發明屬于生物、醫藥技術領域，涉及重要抗菌藥物的藥敏試驗，具體涉及替加環素的藥敏試驗，尤其是針對替加環素藥敏試驗中，恢復抗菌活性的方法。

背景技術

現有技術公開了抗菌藥物的不合理使用及濫用，導致細菌對其的耐藥率快速上升。根據2015年CHINET中國細菌耐藥監測結果顯示，自2005年開始，臨床分離的革蘭陰性桿菌對重要抗菌藥物尤其是碳青霉烯類藥物的耐藥率快速上升。國內30所醫院臨床分離的肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類抗菌藥物的耐藥率平均值為15％，部分醫院可高達50％。鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類的耐藥率平均值在60％以上，部分醫院可高達90％。由于碳青霉烯類藥物被人為之治療此類耐藥細菌所致感染最有效的抗菌藥物，細菌對其耐藥可導致臨床的抗感染治療陷入無藥可用的困境。

替加環素作為治療碳青霉烯類耐藥菌株所致感染的重要抗菌藥物，其藥敏試驗結果的準確性對臨床的抗感染治療選擇具有重要的參考價值。但由于替加環素理化性質活潑，含多酚基團，易氧化降解或形成差向異構體，不宜在光線及空氣中久置；配置后的培養基隔夜存放也會使檢測結果升高，其中肉湯較瓊脂更容易溶解氧，導致采用常規方法測定其敏感性時往往出現假耐藥現象。錳離子對Etest法對替加環素測定結果影響的結果顯示，對于不動桿菌屬、黏質沙雷菌、肺炎鏈球菌，Etest檢測方法的MIC結果較微量肉湯稀釋法高，尤其是在鮑曼MIC₉₀高4個稀釋倍數。培養基存放時間過長對測定結果影響較大，需使用當天新鮮配制的培養基，肉湯培養基中氧含量較高，存放時間過長由于氧化作用而使替加環素失活。以經典的微量肉湯稀釋法為參考方法，比較不同藥敏試驗方法測定替加環素敏感性發現，肉湯微量稀釋法的MIC₅₀/MIC₉₀為1/4mg/l，Vitek系統、Etest、MTS方法測定結果分別為：4/≥8mg/l、2/4mg/l、0.5/2mg/l。以FDA或/EUCAST為判斷標準，三種藥敏方法在測定替加環素敏感性上均存在大誤差或重大誤差。CHINET中國細菌耐藥監測結果顯示，某些醫院若采用常規紙片擴散法藥敏試驗測定替加環素的藥敏試驗，其中介率和耐藥率之和可達60％以上，而是加上此部分菌株若采用微量肉湯稀釋法進行測定，中介率和耐藥率均為0％。

發明內容

本發明的目的是基于現有技術存在的缺陷，提供一種恢復替加環素抗菌活性的方法，尤其是針對替加環素藥敏試驗影響因素的方法。

為了在體外常規藥敏試驗中，準確測定替加環素的敏感性結果，本發明采用一種復敏液(具體為：乙二胺四乙酸(EDTA)溶液，濃度范圍為0.02mol/L-2.0mol/L)，可保持替加環素在不同環境下的穩定性，不易被降解。

本發明提供了EDTA的新用途，即EDTA在制備替加環素的穩定劑復敏液中的用途；所述的EDTA的濃度范圍為0.02mol/L-2.0mol/L。

較好的，EDTA保持替加環素的穩定性。例如，EDTA保持替加環素不易被降解。

本發明有助于獲得真實可靠的體外替加環素藥敏結果。

較好的，所述的應用包括機器自動化檢測、紙片擴散法試驗、瓊脂稀釋法試驗、Etest試驗、微量肉湯稀釋法或者試管稀釋法試驗。

其中，所述的紙片擴散法試驗包括在一張替加環素紙片上滴加2-20μl的復敏液的步驟。