[發明專利]eEF1D蛋白在制備預防或治療口蹄疫病毒感染藥物中的應用

有效

• 申請號: 202010779829.1
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN111793721B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 鄭海學;劉會勝;薛巧;朱紫祥;楊帆;薛釗寧;曹偉軍;劉湘濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12N5/10;C12N15/12;C12N15/867;C12N15/113;C07K14/47;G01N33/68;G01N33/569;A61K45/00;A61P31/14
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 戴治娟

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種eEF1D蛋白在制備預防或治療口蹄疫病毒感染藥物中的應用。本發明發現感染口蹄疫病毒后eEF1D mRNA的表達增高，同時eEF1D蛋白含量降低，即eEF1D mRNA和eEF1D蛋白可以作為口蹄疫病毒感染后的檢測標記物，用于評價是否感染口蹄疫病毒；其次，eEF1D蛋白能夠顯著降低口蹄疫病毒的結構蛋白VP1、口蹄疫病毒mRNA的表達以及口蹄疫病毒滴度，顯著抑制口蹄疫病毒的復制，可用于預防或治療口蹄疫病毒的感染；最后，敲低eEF1D蛋白后，促進了口蹄疫病毒結構蛋白VP1的表達，提高了口蹄疫病毒mRNA的表達和病毒滴度，因此，可通過基因工程手段在生產細胞株中敲低eEF1D蛋白，獲得一種比現有生產細胞系生產口蹄疫病毒疫苗性能更好的細胞系，用于口蹄疫病毒疫苗的生產。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種eEF1D蛋白在制備預防或治療口蹄疫病毒感染藥物中的應用。

背景技術

小核糖核酸(RNA)病毒科是由RNA病毒中最小的類群組成的一科，主要包括腸道病毒屬、鼻病毒屬、心病毒屬以及口瘡病毒屬，并且小RNA病毒科四個屬病毒的結構蛋白具有高度同源性。其中口蹄疫屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒屬(Aphthovirus)，是一種由口蹄疫病毒引起的重要的感染偶蹄動物的疾病。

口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus，FMDV)感染偶蹄類動物(豬、牛、羊、駱駝等)引起的急性、熱性和接觸性的一類傳染病。FMDV核酸類型為單鏈正股RNA，包含七個血清型，各型之間無交叉保護反應?？谔阋叩陌l病率高、傳染迅速、危害嚴重，世界動物衛生組織(OIE)將其列為A類烈性動物傳染病，我國列為一類動物傳染病。目前疫苗接種是特異性預防口蹄疫(FMD)的有效手段，FMD弱毒疫苗和滅活疫苗等常規疫苗都具有良好的免疫原性，在預防和控制FMD的過程中發揮著重要作用。但由于口蹄疫血清較多，無交叉保護，這給以疫苗免疫為主的控制措施帶來了巨大的挑戰，并且病毒毒力返強、病毒滅活不徹底、活病毒逃逸加工廠等不安全因素，世界上一些地區FMD的暴發似乎與滅活疫苗中殘存的活病毒有關。因此，如何更好地抑制病毒蛋白的表達，是預防或控制病毒感染的一種有效途徑。

前期研究表明，TANK結合激酶1(TBK1)是磷酸化IRF3/7的主要激酶，也是TLR和RLR介導的IFN-β表達中的關鍵激酶；TBK1不僅能夠作為一種新的E3泛素連接酶，而且能有效降解病毒VP3蛋白，進而顯著抑制小核糖核酸病毒科，尤其是FMDV的蛋白組裝，可抑制小核糖核酸病毒科病毒的復制，但是TBK1僅能有效降解病毒VP3蛋白，而對其他結構蛋白的作用較弱。

而真核生物的mRNA在核糖體上翻譯成蛋白質是一個復雜的過程，需要多步反應和多種因子參與，包括翻譯起始、延伸和終止三個階段，分別依賴于翻譯起始因子(eIF)、延伸因子(eEF)和釋放因子(eRF)的參與。真核生物翻譯起始因子主要包括eIF1、eIF1A、eIF2、eIF2B、eIF3、eIF4A、eIF4B、eIF4G、PABP等，延伸因子包括eEF2、eEF1A、eEF1G、eEF1B2(eEF1Bα)、eEF1D(eEF1δ或eEF1Bβ)，釋放因子包括eRF1和eRF3。真核生物的mRNA是m7G帽依賴性的翻譯。其中蛋白質翻譯延伸因子eEF1D是一個多功能蛋白，其在蛋白質翻譯延伸和癌癥調節過程中均發揮著重要作用。有研究表明，人類免疫缺陷病毒的Tat蛋白與eEF1D相互作用，進而抑制宿主蛋白的翻譯；而單純皰疹病毒感染修飾了eEF1D，提高了其分子量。