[發(fā)明專利]一組與小麥粒重相關的KASP引物組及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010779480.1
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN111763762B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發(fā)明（設計）人: 姜朋;馬鴻翔;張旭;吳磊;何漪
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業(yè)科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 楊文晰

1.一組與小麥粒重相關的KASP引物組在檢測小麥粒重中的應用，其特征在于，所述KASP引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的F1引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的F2引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的通用引物；攜帶T優(yōu)勢等位變異的小麥樣品粒重高于攜帶C非優(yōu)勢等位變異的小麥樣品；

所述小麥為以寧麥9號和揚麥158為親本構建的重組自交系群體。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，步驟如下：利用所述KASP引物組配制成PCR檢測體系并對樣品小麥DNA進行PCR擴增，同時以揚麥158與寧麥9號作為對照，然后利用熒光分析儀對樣品小麥PCR擴增產物進行基因分型；攜帶T優(yōu)勢等位變異的小麥樣品粒重高于攜帶C非優(yōu)勢等位變異的小麥樣品。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述PCR檢測體系為5μL，包含2×KASPMaster Mix 2.5μL、KASP Assay Mix 0.07μL、濃度為20 ng/μL的模板DNA 2.43μL；

其中，每100μL的KASP Assay Mix配制方法如下：100μM 的所述F1引物12μL、100μM 的所述F2引物 12μL 、100μM的所述通用引物 30μL、ddH₂O補足至100μL；

PCR擴增程序為：第一步：94℃，15 min；第二步：94℃，20 s，61~55℃，1 min，每個循環(huán)降低0.6℃，共進行10個循環(huán)；第三步：94℃，20 s，55℃，1 min，共進行26個循環(huán)。