[發(fā)明專利]一種水體中副溶血弧菌的現(xiàn)場檢測試劑盒和檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010778384.5
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN111855753B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曲克明;張旭志;朱建新;徐勇;張艷;楊倩倩;閆華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: G01N27/06
• 分類號: G01N27/06
• 代理公司: 北京科家知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 梁正賢

1.利用試劑盒檢測水體中副溶血弧菌的方法，其特征在于所述試劑盒包括溴化N-十二烷基異喹啉試劑、副溶血弧菌烈性噬菌體懸液和濃度梯度為10¹¹、10¹⁰、10⁹、10⁸、10⁷、10⁶和10⁵CFU/ml副溶血弧菌的菌懸液；

所述方法包括以下步驟：

1)取待測水體，平均分成兩份，分別裝入S_A和S_B兩個離心管；其中，S_B中的水體即為待測樣S_測，S_A加入溴化N-十二烷基異喹啉，在便攜式超聲波儀中超聲5min，超聲功率30W，使水體中所有種類的細菌完全裂解，制成陰性對照液S_陰；

2)取一定量S_陰液，加入已知濃度的副溶血弧菌菌懸液，制成含有10⁶CFU/ml副溶血弧菌的陽性對照液S_陽；

3)取相同體積的S_測、S_陰和S_陽，分別裝入檢測管T_測、T_陰和T_陽,然后再分別加入等量副溶血弧菌烈性噬菌體懸液，混勻；

4)將檢測管T_測、T_陰和T_陽同時、分別放入化學(xué)和生物過程在線監(jiān)測系統(tǒng)的三個檢測通道中，分別記錄三個檢測管中被測液的初始電容耦合非接觸電導(dǎo)響應(yīng)值σ_測初、σ_陰初和σ_陽初；靜止30min后，再分別記錄三個檢測管中被測液的終點電容耦合非接觸電導(dǎo)響應(yīng)值σ_測終、σ_陰終和σ_陽終；

5)根據(jù)下面公式分別計算S_測、S_陰和S_陽的電容耦合非接觸電導(dǎo)響應(yīng)變化值：

Δσ_測＝σ_測終-σ_測初

Δσ_陰＝σ_陰終-σ_陰初

Δσ_陽＝σ_陽終-σ_陽初

6)將Δσ_測數(shù)值帶入工作曲線函數(shù)關(guān)系式獲得待測水體中副溶血弧菌的濃度；根據(jù)σ_陰≤2μS/cm和Δσ_陽≥10μS/cm判定實驗沒有假陽性和假陰性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于步驟6)所述工作曲線的制定步驟如下：

1)按照制備陽性對照樣品S_陽的相同方法，分別制備含有10¹⁰、10⁹、10⁸、10⁷、10⁶、10⁵和10⁴CFU/ml副溶血弧菌的菌懸液S_陽10、S_陽9、S_陽8、S_陽7、S_陽6、S_陽5和S_陽4；

2)取相同體積S_陽10、S_陽9、S_陽8、S_陽7、S_陽6、S_陽5、S_陽4和陰性對照S_陰分別裝入檢測管T_陽10、T_陽9、T_陽8、T_陽7、T_陽6、T_陽5、T_陽4和T_陰,然后再分別加入等量副溶血弧菌烈性噬菌體懸液，混勻；

3)將檢測管T_陽10、T_陽9、T_陽8、T_陽7、T_陽6、T_陽5、T_陽4和T_陰共8個檢測管同時、分別插入化學(xué)和生物過程在線監(jiān)測系統(tǒng)的8個檢測通道中，分別記錄被測液的初始電容耦合非接觸電導(dǎo)響應(yīng)值σ_陽10初、σ_陽9初、σ_陽8初、σ_陽7初、σ_陽6初、σ_陽5初、σ_陽4初和σ_陰初；靜止30min后，再分別記錄8個檢測管中被測液的終點電容耦合非接觸電導(dǎo)響應(yīng)值σ_陽10終、σ_陽9終、σ_陽8終、σ_陽7終、σ_陽6終、σ_陽5終、σ_陽4終和σ_陰終；

4)根據(jù)公式Δσ＝σ_終-σ_初，分別計算S_陽10、S_陽9、S_陽8、S_陽7、S_陽6、S_陽5、和S_陽4的電容耦合非接觸電導(dǎo)初始響應(yīng)值σ_初和終點響應(yīng)值σ_終之間的差值，并將所得數(shù)據(jù)對副溶血弧菌的濃度logC作圖，得到Δσ與logC之間的函數(shù)關(guān)系；同時，根據(jù)Δσ_陰≤2μS/cm判定實驗沒有假陽性結(jié)果。