[發明專利]一種用于分析與發掘消化道益生菌產生的功能性代謝物的方法

在審

• 申請號: 202010776581.3
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN111896655A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 戴兆來;李溱;劉沫言;宋慶慶;伍師哲;武振龍
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/88;G01N33/68;G01N15/14
• 代理公司: 北京迎碩知識產權代理事務所(普通合伙) 11512
• 代理人: 錢揚保;李正榮

1.一種用于分析與發掘消化道益生菌產生的功能代謝物的方法，其特征在于，所述方法聯合運用完全合成培養基的體外培養方法與比較代謝組學方法進行研究與分析，具體地，所述方法包括如下步驟：

(1)復蘇益生菌，富集培養益生菌，并傳代培養于完全合成培養基；

(2)取益生菌菌液，將菌液重懸于完全合成培養基，作為接種物備用；

(3)將步驟(2)接種物接種于添加膽鹽溶液的完全合成培養基，培養，采集樣品；

(4)提取益生菌發酵液中的代謝物；

(5)利用比較代謝組學方法分析步驟(4)的代謝物。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)的完全合成培養基中的膽鹽溶液的組分包含甘膽酸鈉、甘氨鵝脫氧膽酸鈉、牛膽酸鈉、?；蛆Z去氧膽酸鈉。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述膽鹽溶液的配制方法為：稱取甘氨酸鈉0.1-0.4g、甘氨鵝脫氧膽酸鈉0.1-0.4g、牛膽酸鈉0.02-0.06g、牛磺鵝去氧膽酸鈉0.02-0.06g，使用磷酸緩沖液溶解并準確定容至10mL，過濾滅菌；

優選地，稱取甘膽酸鈉0.22g、甘氨鵝脫氧膽酸鈉0.20g、牛膽酸鈉0.04g、?；蛆Z去氧膽酸鈉0.04g。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述膽鹽溶液在完全合成培養基中添加量為0.2-0.8g/L，優選為0.5g/L。

5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，所述完全合成培養基中包含氨基酸組分，氨基酸組分包含：天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、絲氨酸、谷氨酰胺、組氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、瓜氨酸、精氨酸、?；撬?、丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、鳥氨酸鹽酸鹽、賴氨酸、脯氨酸、半胱氨酸。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述完全合成培養基中氨基酸各組分含量為：

優選地，所述完全合成培養基中氨基酸各組分含量為：

7.根據權利要求1-6任一項所述的方法，其特征在于，所述完全合成培養基中每升培養基還包含：葡萄糖5-20g、乳酸鈉2.0-3.0g、氯化鉀0.5-0.7g、氯化鈉0.5-0.7g、磷酸氫二鉀0.9-1.1g、磷酸二氫鉀4.5-5.5g、氯化鈣0.1-0.2g、七水合硫酸鎂0.45-0.55g、乙酸鈉0.9-1.1g、檸檬酸銨0.5-0.7g、抗壞血酸0.4-0.6g、腺嘌呤0.01-0.02g、鳥嘌呤0.01-0.02g、肌苷0.005-0.01g、乳清酸0.005-0.01g、胸苷0.005-0.01g、尿嘧啶0.005-0.015g、黃嘌呤0.005-0.15g、9-11mL血紅素溶液(0.01％,w/v)、9-11mL脂肪酸溶液、9-11mL還原劑溶液、9-11mL微量元素溶液、9-11mL維生素母液、45-55mL碳酸氫鈉溶液及0.9-1.1mL刃天青溶液(1％,w/v)；

優選地，所述完全合成培養基中每升培養基還包含：葡萄糖10g、乳酸鈉2.7g、氯化鉀0.6g、氯化鈉0.6g、磷酸氫二鉀1g、磷酸二氫鉀5g、氯化鈣0.15g、七水合硫酸鎂0.5g、乙酸鈉1g、檸檬酸銨0.6g、抗壞血酸0.5g、腺嘌呤0.01g、鳥嘌呤0.01g、肌苷0.005g、乳清酸0.005g、胸苷0.005g、尿嘧啶0.01g、黃嘌呤0.01g、10mL血紅素溶液(0.01％,w/v)、10mL脂肪酸溶液、10mL還原劑溶液、10mL微量元素溶液、10mL維生素母液、50mL碳酸氫鈉溶液及1mL刃天青溶液(1％,w/v)。