[發明專利]檢測生物制品中SV40核酸的引物組、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010776486.3
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN111944924A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 劉浩斌;陶飛龍;陳金;盧彬彬;何麗婷
• 申請（專利權）人: 上海韻飛生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
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本發明適用于生物技術領域，提供了一種檢測生物制品中SV40核酸的引物組、試劑盒及方法，該試劑盒包括熒光標記探針和引物組；其中，引物組包括：正向引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；以及反向引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示；熒光標記探針的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示。本發明實施例通過上述引物組和熒光標記探針，可以用于準確、靈敏地定量檢測抗體和疫苗等生物制品中SV40核酸的殘留量，從而可以準確地評估生物制品中殘余SV40核酸的風險，其在生物制品殘余雜質質量控制方面具有廣泛的用途。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種檢測生物制品中SV40核酸的引物組、試劑盒及方法。

背景技術

SV40（Simian vacuolating virus 40）是猴空泡病毒40的縮寫，屬多瘤病毒科，是在人類和猴子都發現的致瘤病毒。

治療性重組蛋白和單克隆抗體已成為重要的且正在增長的生物制品類別，用于治療和管理當前尚未滿足的醫療需求的多種疾病。使用重組DNA技術生產的生物制品產品存在含有源自宿主細胞的殘留雜質的風險。殘留雜質之一是宿主細胞DNA，當其含量高時，它具有致癌或免疫原性的潛在風險。FDA要求制造商報告純化后宿主細胞中仍有多少殘留DNA殘留在原料藥中。

因此，對于防治SV40病毒的重組生物制品，準確測量和控制重組生物制品中存在的宿主細胞SV40核酸是提高生物制品質量和保證病人健康的關鍵。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供一種檢測生物制品中SV40核酸的引物組，旨在解決背景技術中提出的問題。

本發明實施例是這樣實現的，一種檢測生物制品中SV40核酸的引物組，其特征在于，包括：

正向引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；以及反向引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。

本發明實施例的另一目的在于提供一種檢測生物制品中SV40核酸的試劑盒，其包括熒光標記探針以及上述的引物組。

作為本發明實施例的另一個優選方案，所述試劑盒中，正向引物的濃度為50~150μmol/L，反向引物的濃度為50~150μmol/L。

作為本發明實施例的另一個優選方案，所述熒光標記探針的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示。

作為本發明實施例的另一個優選方案，所述試劑盒中，熒光標記探針的濃度為50~150μmol/L。

作為本發明實施例的另一個優選方案，所述熒光標記探針的兩端分別連接有報告基團和淬滅基團。

作為本發明實施例的另一個優選方案，所述報告基團為FAM基團，所述淬滅基團為MGB基團。

本發明實施例的另一目的在于提供一種采用上述試劑盒檢測生物制品中SV40核酸的方法，其包括以下步驟：

取多組含有不同濃度的SV40核酸的標準樣品；

將多組標準樣品分別與所述熒光標記探針和所述引物組進行實時熒光定量PCR檢測，并根據檢測結果繪制標準曲線；

取待檢測的生物制品；

將待檢測的生物制品與所述熒光標記探針和所述引物組進行實時熒光定量PCR檢測，并根據所述標準曲線計算得到待檢測的生物制品中殘留的SV40核酸的含量。